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產(chǎn)品型號50次

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廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所在地上海

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更新時間：2020-08-10 13:47:45瀏覽次數(shù)：541次

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產(chǎn)品分類品牌分類

PCR試劑盒: PCR-染料法 PCR-探針法

全部產(chǎn)品列表

產(chǎn)品簡介

供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0522	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴增效率,、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性,。

肺炎支原體染料法熒光定量PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒,，根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β,、γ,、未分類皰疹病毒四個亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛,，可感染人類和其他脊椎動物,。在自然界廣泛存在，主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織，例如：皮膚,、粘膜和神經(jīng)組織,。

詳情介紹

肺炎支原體染料法熒光定量PCR試劑盒

Mycoplasma pneumoniae

產(chǎn)品及特點

肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae ）是人類支原體肺炎的病原體。支原體肺炎的病理改變以間質(zhì)性肺炎為主,，有時并發(fā)支氣管肺炎,，稱為原發(fā)性非典型性肺炎。主要經(jīng)飛沫傳染,，潛伏期 2-3 周,，發(fā)病率以青少年高。臨床癥狀較輕,，甚至根本無癥狀,，若有也只是頭痛、咽痛,、發(fā)熱,、咳嗽等一般的呼吸道癥狀，但也有個別死亡報道,。一年四季均可發(fā)生,，但多在秋冬時節(jié)。本產(chǎn)品就是以染料法熒光定量 PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測肺炎支原體的試劑盒,，它具有下列特點：

1. 即開即用,，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 特異性高,，引物是根據(jù)肺炎支原體高度保守區(qū)設(shè)計,不會擴增其他微生物,。

3. 引物和擴增體系經(jīng)過優(yōu)化，靈敏性比常規(guī) PCR 高 100 倍,。

4. 提供無傳染性的 PCR 陽性對照,，便于區(qū)分假陰性樣品。

5. 一管式操作,，熒光 PCR 檢測,，不容易產(chǎn)生環(huán)境污染。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研,，本試劑盒足夠 50 次 20μL 體系的 PCR,。

肺炎支原體染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成分	規(guī)格
試劑一	2×PCR MagicMix	500μL（棕色）
試劑二	熒光 PCR 模板稀釋液	1 mL（黃蓋）
試劑三	肺炎支原體染料法 qPCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	肺炎支原體染料法 qPCR 陽性對照(1×10E8 拷貝/μL)	50μL（紅蓋）
試劑五	天凈沙核酸釋放劑試用裝	20 次（1mL，綠蓋））
試劑六	使用手冊	1 份

運輸及保存 低溫運輸,，-20℃保存,，保存期限為 12 個月。

自備試劑 樣品 DNA,。

使用方法 一,、制備標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,，只提供無傳染性的 DNA 段作為陽性對照。

1. 標(biāo)記 6 個離心管,，分別為 7,，6，5,，4,，3，2,。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,，用帶芯槍頭，下同）,。

3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（其濃度為 1×10E8 拷貝/μL,，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。

4. 換槍頭,，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。

5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。

二,、樣品 DNA 的制備

7. 用自選方法純化樣品的 DNA,，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。

8. 如果有 N 個樣品,，則需要進行 N+2 個樣品提取,，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。

三,、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系,，在樣品制備室進行）

9. 如果進行定量分析，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,，1 個用于 PCR 陰性對照，6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。如果做定性分析,，則 6 個標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品只選一個做（可以選 4 號，其余樣品不變）,。以下只介紹定量分析的反應(yīng)設(shè)置,。

10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分：

成分	樣品管 N+2 個	PCR 陰性對照管	標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品管（2-7 管）
2×qPCR MagicMix	10 μL	10 μL	各 10 μL
肺炎支原體染料法 qPCR 引物混合液	2 μL	2 μL	各 2 μL
自備 10×ROX (見注)	2 μL	2 μL	各 2 μL
N+2 個待測樣品 DNA 模板	6 μL
自備超純水		6 μL
第 7 步所得 PCR 陽性對照稀釋液（2-7 號）			各 6μL（2 號樣到 2 號管，3 號樣到 3 號管…）

11. 蓋上蓋子后上機,，按下面參數(shù)進行 PCR（具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化）,。

四、熒光定量 PCR 反應(yīng)參數(shù)

過程	溫度	時間
預(yù)熱	50℃	2 min
預(yù)變性	95℃	10 min
PCR 反應(yīng) （40 個循環(huán)）	95℃	15 sec
PCR 反應(yīng) （40 個循環(huán)）	60℃	1 min（采集 SYBR 通道的熒光信號）

五,、數(shù)據(jù)處理

12. 設(shè)定 60℃-96℃范圍的熔解曲線分析,，排除假陽性。

13. 如果把本試劑盒用于定量檢測,，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,，再推算出其濃度。

14. 如果把本試劑盒用于定性檢測,，只判斷陽性或陰性,，則陰性對照 Ct 必須大于或等于 32。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,，有典型擴增曲線,，Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對待測樣品,，如果其 Ct 大于或等于 32 則為陰性,，如果小于或等于 30 則為陽性。如果在 30-32 之間,，則重復(fù)一次,。重復(fù)實驗的 Ct 值如果大于或等于 32 則為陰性，如果小于 30,，則為陽性,。