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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0521	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率,、更高的擴(kuò)增靈敏度,、更高的擴(kuò)增特異性。

肺炎支原體PCR試劑盒

Mycoplasma pneumoniae

產(chǎn)品及特點(diǎn)

肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae ）是人類支原體肺炎的病原體,。支原體肺炎的病理改變以間質(zhì)性肺炎為主，有時并發(fā)支氣管肺炎,，稱為原發(fā)性非典型性肺炎,。主要經(jīng)飛沫傳染，潛伏期 2-3 周,，發(fā)病率以青少年高,。臨床癥狀較輕，甚至根本無癥狀,，若有也只是頭痛,、咽痛、發(fā)熱,、咳嗽等一般的呼吸道癥狀,，但也有個別死亡報道。一年四季均可發(fā)生,，但多在秋冬時節(jié),。本試劑盒是根據(jù) PCR 原理開發(fā)，具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用,，用戶只需準(zhǔn)備樣品 DNA 模板,。

2. 根據(jù)肺炎支原體保守區(qū)設(shè)計引物。

3. 特異性高,，跟其他微生物無交叉反應(yīng),。

4. 靈敏高，可檢測低至幾個拷貝/反應(yīng)的支原體污染,。

5. 提供內(nèi)參和無感染性的支原體陽性對照（DNA 段）,，能有效避免實驗結(jié) 果的假陽性和假陰性。

6. 可用于培養(yǎng)細(xì)胞,、疫苗,、血清、重組蛋白和耗材的污染檢測,。但不能用于臨床診斷,。

7. 本產(chǎn)品足夠至少 50 次 40μL 體系 PCR 檢測(含陽性對照和陰性對照反應(yīng))。

肺炎支原體PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.	1 mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1 mL（亮黃色））
試劑三	肺炎支原體 PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	肺炎支原體 PCR 陽性對照（1×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋））
試劑五	使用手冊	1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,，-20℃保存,，保存期限為一年。陽性對照需要單獨(dú)放置,，不要污染其他試劑,。

自備試劑樣品 DNA,。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品,，必須設(shè)置 N+2 個提取,，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）,?？梢杂?10μL 陽性對照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為 PC,。另外用水作為 NC,。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)寄生蟲 DNA 提取試劑盒兼容,。

二,、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性對照,，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng),。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分：

成分	N+2個樣品管	PCR陰性對照	PCR陽性對照
PCR Magic Mix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μL
肺炎支原體引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2 個樣品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 陰性對照（水）		18 μL	-
PCR 陽性對照（肺炎支原體 PCR 陽性對照的 10000 倍稀釋液）	-		18 μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過程	溫度	時間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR反應(yīng) （35個循環(huán)）	95℃	30 sec
	57℃	30 sec
	72℃	20 sec
后延伸	72℃	7 min

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物,。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物,。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer,。PCR 產(chǎn)物陽性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn),，陰性對照必須無任何擴(kuò)增,，否則實驗無效,。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染,。