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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0487	應用領域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產業(yè),農林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴增效率,、更高的擴增靈敏度,、更高的擴增特異性。

小鼠肝炎病毒RT-PCR試劑盒

Mouse Hepatitis Virus(MHV)

產品及特點

小鼠肝炎病毒(Mouse Hepatitis Virus，MHV)會引起小鼠肝炎,，但在正常情況下大多呈不顯性感染,，只在應激因素激發(fā)下才能成為致死性疾病，主要為肝炎和腦炎,。老齡小鼠感染后會出現(xiàn)腹水,，乳鼠,，或在球狀附紅細胞體參與下感染的成年小鼠，肝呈黃色或褐色,，并有出血斑點,；腎腫脹而蒼白。小鼠肝炎病毒,，無論在體內外,，均易建立持續(xù)感染，帶毒小鼠分布于*,，感染范圍廣,，影響力大，因此快速靈敏診斷具有重要意義,。為此本公司開發(fā)了本產品,，可用于在科研領域快速定量檢測小鼠肝炎病毒。它具有下列特點,。它具有下列特點：

1. 一站式,，用于不需要單獨準備每種成分，包括引物和對照,。

2. 根據小鼠肝炎病毒的保守基因序列設計的引物,，具有良好的特異性。

3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應,。

4. 使用一管式 RT-PCR 技術,，RT 和 PCR 兩步在一個試管內完成，不需要中間轉移樣品,，降低了操作誤差和可能的污染,。

5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。

6. 本產品只能用于科研,，不能用于臨床。

小鼠肝炎病毒RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成份	規(guī)格
試劑一	5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橘黃蓋）
試劑二	MMLV-Taq Mix	75 μL（紅蓋）
試劑三	超純水	1 mL（亮黃蓋）
試劑四	小鼠肝炎病毒 RT-PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑五	小鼠肝炎病毒 RT-PCR 陽性對照（1×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋）
試劑六	天凈沙核酸釋放劑（試用裝）	20 次（1mL,，綠蓋）
試劑七	使用手冊	1 份）

運輸及保存 低溫運輸,，-20℃保存，保存期限為 12 個月,。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分開放置,，因為其容易污染其他成分，造成假陽性,。

自備試劑 樣品 RNA

使用方法 一,、樣品 RNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設置 N+2 個提取,，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照）,，一個是 NC（樣品制備陰性對照）,。可以用 10μL 流行性出血熱病毒 PCR 陽性對照的 100 倍稀釋作為制備的陽性對照,；用水作為制備的陰性對照,。制備所得成為樣品 RNA。

2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA,，本試劑盒跟市場上大多數病毒 RNA 提取試劑盒兼容,。

二、設置 RT-PCR 反應（20μL 體系）

3. 如果有 N+2 個樣品,，則標記 N+4 個 PCR 管（額外增加的兩個管一個是 RT-PCR 陽性對照,，另一個是 RT-PCR 陰性對照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

成分	樣品	陽性對照	陰性對照
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	各 4 μL	4 μL	4 μL
小鼠肝炎病毒 RT-PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2 個制備的 RNA 樣品	各12.5 μL
超純水		12.5 μL
小鼠肝炎病毒 RT-PCR 陽性對照的 100 倍稀釋液	L		12.5 μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4. 上機進行 RT-PCR，RT-PCR 反應參數為:

過程	溫度	時間
逆轉錄	42℃	30 min
預變性	95℃	5 min
PCR 反應（35 個循環(huán)）	95℃	30 sec
PCR 反應（35 個循環(huán)）	55℃	30 sec
延伸	72℃	60 sec