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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0457	應用領域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度,、更高的擴增特異性,。

單核細胞增生李斯特菌PCR試劑盒

Listeria monocytogenes

產(chǎn)品及特點

單核細胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)屬乳酸桿菌科，為革蘭氏陽性小桿菌,，可以污染食品,，導致李斯特病的發(fā)病率日趨上升，臨床表現(xiàn)主要有腦膜炎,、敗血性肉芽腫,、淋巴結腫大等。本病遍及世界各地,，是人畜共患的傳染病,。人類感染有增多趨勢，特別是新生兒,、老年人,、孕婦及免疫功能低下者易感性更高。對食品中的單增利斯特菌做出快速的檢測和鑒定,，是預防利斯特病的有效方法,，因此單核細胞增生李斯特菌的快速準確鑒定對該病的預防和檢疫有著重要作用。本試劑盒根據(jù)熒光定量PCR原理開發(fā),，它具有下列特點：

1.即開即用,，用戶只需要提供細菌DNA模板。
2.引物經(jīng)過精心優(yōu)化,，專一性強,，只擴增單核細胞增生李斯特菌。
3.提供陽性對照,，便于區(qū)分假陰性樣品,。
4.PCR mix中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳,。
5.本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次,。
6.本產(chǎn)品只能用于科研。

單核細胞增生李斯特菌PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.	1 mL（亮黃蓋）
試劑二	超純水	1 mL（藍色）
試劑三	單核細胞增生李斯特菌 PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	單核細胞增生李斯特菌PCR陽性對照	100 μL（黃蓋）
試劑五	天凈沙DNA釋放劑試用裝	50次（試用裝）
試劑六	使用手冊	1 份

運輸及保存 低溫運輸,，-20℃保存,，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置,，不要污染其他試劑,。

自備試劑樣品 DNA。

使用方法 一,、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品,，必須設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照）,，一個是 NC（樣品制備陰性對照）,?？梢杂?10μL 陽性對照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為 PC,。另外用水作為 NC,。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)寄生蟲 DNA 提取試劑盒兼容,。

二,、設置 PCR 反應（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性對照,，故需要設置 N+4 個反應,。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分：

成分	N+2個樣品管	PCR陰性對照	PCR陽性對照
PCR MagicMix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μL
單核細胞增生李斯特菌PCR引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2個樣品DNA模板	各18 μL	-	-
樣品制備陰性對照	-	18 μL	-
樣品制備陽性對照	-	-	18 μL

4. 按下表設置 PCR 反應：

過程	溫度	時間
預變性	94℃	5 min
PCR反應（35個循環(huán)）	94℃	20 sec
	50℃	20 sec
	72℃	30 sec
后延伸	72℃	10 min

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物,。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物,。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴增結束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer,。PCR 產(chǎn)物陽性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn),，陰性對照必須無任何擴增，否則實驗無效,。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品,，可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。