傳染性胰臟壞死病病毒RT-PCR試劑盒

Infectious Pancreatic Necrosis Virus(IPNV)

產品及特點

傳染性脾腎壞死病病毒(Infectious Spleen and Kidney Necrosis Virus,， ISKNV）會引起傳染性脾腎壞死病，是以脾,、腎壞死為主要病理特征的一種病毒 性疾病,。病魚嘴張大，呼吸加快,，食欲下降,，魚體變黑，有時有抽筋樣顫動,；頭 部充血，口四周和眼出血,；脾臟腫大,、糜爛和充血，呈紫黑色,；腎臟腫大,、充血 和潰爛；肝臟腫大,，有缺血狀,、土黃色或有淤血點等癥狀；常見有腹水,，腸內有 時充滿黃色粘稠物,，膽囊腫大；鰓貧血,，發(fā)白,，伴有寄生蟲或細菌感染出現出血、 腐爛等現象,。傳染性脾腎壞死病主要流行于我國南方淡水養(yǎng)殖的鱖中,，具有很高 的死亡率，對鱖養(yǎng)殖業(yè)造成很大的威脅,，嚴重危害我國鱖養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展,，因此傳染 性脾腎壞死病病毒的快速準確鑒定對該病的預防和檢疫有著重要作用，為此本公 司開發(fā)了簡單快捷的傳染性脾腎壞死病病毒染料法熒光定量 PCR 檢測試劑盒,， 它具有下列特點： 

1. 一站式,，用于不需要單獨準備每種成分，包括引物和對照,。

2. 根據傳染性脾腎壞死病病毒的保守基因序列設計的引物,，具有良好的特異性。

3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應,。

4. 使用一管式 RT-PCR 技術,，RT 和 PCR 兩步在一個試管內完成,，不需要中間 轉移樣品，降低了操作誤差和可能的污染,。

5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR,。

6. 本產品只能用于科研，不能用于臨床,。

傳染性胰臟壞死病病毒RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存,，保存期限為 12 個月,。收到貨后陽性對照需要跟其他成分 分開放置，因為其容易污染其他成分,，造成假陽性,。 

自備試劑 樣品 RNA

使用方法 一、樣品 RNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品,，必須設置 N+2 個提取,，多出的一個是 PC（樣品制備陽性 對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）,?？梢杂?10μL 流行性出血熱病毒 PCR 陽性對照的 100 倍稀釋作為制備的陽性對照；用水作為制備的陰性對照,。 制備所得成為樣品 RNA,。

2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒 RNA 提 取試劑盒兼容,。

二,、設置 RT-PCR 反應（20μL 體系）

3. 如果有 N+2 個樣品，則標記 N+4 個 PCR 管（額外增加的兩個管一個是 RT-PCR 陽性對照,，另一個是 RT-PCR 陰性對照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分：

4. 上機進行 RT-PCR,，RT-PCR 反應參數為:

5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果。如果陰性對照有擴增產物或陽性對照無擴增產物,， 則說明實驗失敗,，需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴增產物,、 陽性對照有 122bp 預期的擴增產物的情況下,，才有必要分析樣品的實驗結果， 如果有擴增產物則為陽性,，如果無則為陰性,。