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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0395	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度,、更高的擴(kuò)增特異性,。

人皰疹病毒8型探針法熒光定量PCR試劑盒

Human Herpesvirus-8(HHV-8)

產(chǎn)品及特點

人皰疹病毒 8 型（Human Herpesvirus-8,，HHV-8) 會引起人類的原發(fā) 和繼發(fā)感染,，原發(fā)感染在兒童中多見，水痘的出疹突發(fā),，常出現(xiàn)紅色皮疹或斑疹,，繼續(xù)發(fā)展為成串水皰、膿皰,，后結(jié)痂,。病情一般較輕，但偶可并發(fā)間質(zhì)性肺炎和感染后腦炎,。該病毒對人體健康造成嚴(yán)重?fù)p害,，因此快速檢測人皰疹病毒 8 型具有重要意義。本產(chǎn)品是以探針法熒光定量 PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測人皰疹病毒 8 型試劑盒,，它具有下列特點：

1. 即開即用,，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,，靈敏性高,。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品,。

4. 特異性高,，引物是根據(jù)人皰疹病毒 8 型高高度保守區(qū)設(shè)計，不會跟其他病毒的 DNA 發(fā)生交叉反應(yīng),。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應(yīng),。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。

人皰疹病毒8型探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成分	規(guī)格
試劑一	2×Probe qPCR MagicMix	500 μL（本色蓋）
試劑二	熒光 PCR 模板稀釋液	1 mL（黃蓋）
試劑三	人皰疹病毒 8 型高探針法 qPCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	人皰疹病毒 8 型高 qPCR 探針	50 μL（棕色管）
試劑五	人皰疹病毒 8 型高探針法 qPCR 陽性對照(1×10E8 拷貝/μL)	50 μL（黃蓋）
試劑六	使用手冊	1 份

運輸及保存 低溫運輸、-20℃保存,，有效期一年,。

自備試劑樣品 DNA。

使用方法 一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,，只提供無傳染性的 DNA 段作為陽性對照,。

1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7,，6,，5，4,，3,，2。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,，用帶芯槍頭,，下同）。

3. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。

4. 換槍頭,，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。

5. 換槍頭,，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。

二,、樣品 DNA 的制備

7. 如果有 N 個樣品,，好設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照）,，一個是 NC（樣品制備陰性對照）,。可以用 10μL 陽性對照的 10000 倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,，以此作為 PC,。另外用水作為 NC。

8. 用自選方法純化樣品的 DNA,，本試劑盒跟市場上大多數(shù) DNA 提取試劑盒兼容,。

三、Probe qPCR 反應(yīng)（20μL 體系,，在樣品制備室進(jìn)行）

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如果做定性分析,，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管,，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于 PCR 陽性對照（用第 4 號管的陽性對照稀釋液做模板）,。下面只以定量分析為例描述操作步驟,。

10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè) 置完畢后才設(shè)置陽性對照,，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后后加）：

成分	樣品管 N+2個	PCR陰性對照管	標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品管（2-7管）
2×Probe qPCR MagicMix	10 μL	10 μL	各10 μL
人皰疹病毒 8 型 qPCR 探針	2 μL	2 μL	各2 μL
人皰疹病毒 8 型探針法 qPCR 引物混合液	2 μL	2 μL	各2 μL
N+2 個待測 DNA 模板	7 μL	不加	不加
超純水		7 μL
第7步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液（2-7號）	不加	不加	各7 μL（2號樣到2號管,，3號樣到3號管…）

11.蓋上蓋子后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行PCR：

過程	溫度	時間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR反應(yīng) （40個循環(huán)）	95℃	15 sec
PCR反應(yīng) （40個循環(huán)）	60℃	1 min（采集 FAM 通道的熒光信號）

四,、數(shù)據(jù)處理

12. 如果把本試劑盒用于定量檢測,，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度,。

13. 如果把本試劑盒用于定性檢測,，只判斷陽性或陰性，則陰性對照 Ct 必須大于或等于 40,。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,，有典型擴(kuò)增曲線,，Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對待測樣品,，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,，如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,，則重復(fù)一次,。若重復(fù)結(jié)果 Ct 值小于 40，擴(kuò)增曲線有明顯起峰,，該樣本判斷為陽性,，否則為陰性。