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產(chǎn)品型號50次

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所在地上海

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更新時間：2020-08-03 12:07:34瀏覽次數(shù)：426次

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產(chǎn)品分類品牌分類

PCR試劑盒: PCR-染料法 PCR-探針法

全部產(chǎn)品列表

產(chǎn)品簡介

供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0360	應用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴增效率,、更高的擴增靈敏度,、更高的擴增特異性,。

戊型肝炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒,，根據(jù)其理化性質(zhì)分 α,、β,、γ、未分類皰疹病毒四個亞科,。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛,，可感染人類和其他脊椎動物。在自然界廣泛存在,，主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織,，例如：皮膚,、粘膜和神經(jīng)組織,。

詳情介紹

戊型肝炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

Hepatitis E Virus(HEV)

產(chǎn)品及特點

戊型肝炎(Hepatitis E )是一種經(jīng)糞一口傳播的急性傳染病。HEV 是單股正鏈 RNA 病毒,，呈球形,、直徑 27~34nm 無囊膜，核衣殼呈二十面體立體對稱,。戊型肝炎病毒(HEV)為無包膜的球狀顆粒,，分為 1~8 共 8 個基因型，中國內(nèi)地流行株主要為 1 型(曾稱緬甸株),，其次為 4 型,。目前尚不能對 HEV 進行細胞培養(yǎng)，可實驗室感染獼猴等多種猴類,，HEV 對外界環(huán)境抵抗力不強,。戊型肝炎傳播途徑(主要經(jīng)糞-口途徑傳播)和臨床表現(xiàn)(隱性感染及急性肝炎，不致慢性肝炎等)與甲型肝炎相似,。戊型肝炎在 15~39 歲的青年和成人高發(fā),。戊型肝炎亦為自限性疾病。HEV 對肝細胞亦無直接病變作用(CPE),。機體于病后可獲得一定的免疫力,，但不夠穩(wěn)固。目前無戊型肝炎疫苗,，預防戊型肝炎采用切斷糞-口傳播途徑為主的措施,。本產(chǎn)品是基于染料法熒光定量 PCR 原理開發(fā)，專門檢測戊型肝炎病毒的試劑盒,。它具有下列特點：

1.一站式,，用于不需要單獨準備每種成分，包括引物和對照,。
2.根據(jù)戊型肝炎病毒的保守基因序列設計的引物,，具有良好的特異性,。
3.基于染料法qRT-PCR檢測，靈敏度比常規(guī)RT-PCR高10-100倍,，可以達到至少1000拷貝/反應,。
4.使用一管式qRT-PCR技術(shù)，RT和PCR兩步在一個試管內(nèi)完成,，不需要中間轉(zhuǎn)移樣品,，降低了操作誤差和可能的污染。
5.本產(chǎn)品足夠50次30μL體系的RT-PCR,，只能用于科研,，不能用于臨床。

戊型肝炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成份	規(guī)格
試劑一	2×qRT-PCR 緩沖液	500 μL（棕色管）
試劑二	10×qRT-PCR酶混合液	100 μL（紅蓋）
試劑三	ROX染料I	50 μL（棕色管）
試劑四	ROX染料II	50 μL（棕色管）
試劑五	熒光PCR模板稀釋液	1mL（亮黃蓋）
試劑六	戊型肝炎病毒RT-PCR引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑七	戊型肝炎病毒RT-PCR陽性對照（1×10E8拷貝/μL）	50 μL（黃蓋）
試劑八	使用手冊	1份

運輸及保存 低溫運輸,，-20℃保存,，保存期限為12個月。陽性對照需要因易污染其他成分需要單獨放置,。本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,，只提供RNA段作為陽性對照。

自備試劑 樣品RNA

使用方法 一,、稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例,。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,，只提供無傳染性的的 DNA 段作為陽性對照,。

1. 標記 6 個離心管，分別為 7,，6,，5，4,，3,，2。用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,，用帶芯槍頭,，下同）。

2. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(本試劑盒提供),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

3. 換槍頭,，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用,。

4. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用,。

5. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照,。放冰上待用。二,、樣品 RNA 的制備

6. 如果有 N 個樣品,，必須設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照）,，一個是 NC（樣品制備陰性對照）,。可以用 10μL 上步制備的陽性對照梯度稀釋液中的第 4 號（濃度為 1×10E4 拷貝/μL,，10μL 相當于 1 萬拷貝）再加上一定量的水作為制備的陽性對照（加水后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）,?？梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫φ铡?/p>

7. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA,，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容,。

三、設置 RT-PCR 反應（20μL 體系,，在樣品制備室進行）

8. 如果只做 1 次重復,，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,，1 個用于 RT-PCR 陰性對照,，6 個用于 RT-PCR 陽性對照。 9. 在標記管中按下表加入各成分：

成分	N+2個制備所得樣品	RT-PCR陰性對照	RT-PCR陽性對照（2-7管）
2×qRT-PCR 緩沖液	10μL	10μL	各10μL
戊型肝炎病毒染料法 qRTPCR 引物混合液	2μL	2μL	各2μL
50×ROX (見注)	0.4μL	0.4μL	各0.4μL
樣品制備所得RNA模板（來于第8步）	5.6μL	不加	不加
稀釋所得6個陽性對照（來于第6步）	不加	不加	各5.6μL（2號樣到2號管,，3號樣到3號管…）
10×qRT-PCR 酶混合液	2μL	2μL	2μL

9. 上機后按下面參數(shù)進行 RT-PCR（參數(shù)可能會因儀器不同而需優(yōu)化）,。

過程	溫度	時間
RT（逆轉(zhuǎn)錄）	50℃	30 min
預變性	94℃	10 min
qPCR 反應（40 個循環(huán)）	95℃	15 sec
qPCR 反應（40 個循環(huán)）	60℃	1 min（采集 SYBR 通道的熒光信號）
按儀器預設程序進行溶解曲線分析

四、數(shù)據(jù)處理 10. 如果把本試劑盒用于定性檢測,，只判斷陽性或陰性,，則陰性對照 Ct 必須大于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,，有典型擴增曲線,，Ct 值應該小于或等于 30,。對待測樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,，如果小于或等于 35 則為陽性,。如果在 35-40 之間，則重復一次,。若重復結(jié)果 Ct 值小于 40,，擴增曲線有明顯起峰，該樣本判斷為陽性,，否則為陰性,。