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產(chǎn)品型號50次

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所在地上海

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更新時間：2020-08-03 11:00:31瀏覽次數(shù)：389次

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產(chǎn)品分類品牌分類

PCR試劑盒: PCR-染料法 PCR-探針法

全部產(chǎn)品列表

產(chǎn)品簡介

供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0344	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率,、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性,。

甲型肝炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒,，根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β,、γ,、未分類皰疹病毒四個亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛,，可感染人類和其他脊椎動物,。在自然界廣泛存在，主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織,，例如：皮膚,、粘膜和神經(jīng)組織,。

詳情介紹

甲型肝炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒?

Hepatitis A Virus(HAV)

產(chǎn)品及特點

1973 年 Feinslone 首先用免疫電鏡技術(shù)在急性期患者的糞便中發(fā)現(xiàn)甲型肝炎病毒 (Hepatitis A virus, HAV ) 。為小 RNA 病毒科嗜肝病毒屬,。人類感染 HAV 后,，大多表現(xiàn)為亞臨床或隱性感染，僅少數(shù)人表現(xiàn)為急性甲型肝炎,。甲肝發(fā) 病急,，有發(fā)燒、飯后惡心,、嘔吐,、乏力、小便色似濃茶,、部分病人可伴有黃疸和肝功能異常等癥狀,，因此快速靈敏診斷具有重要意義。本產(chǎn)品是基于染料法熒光定量 PCR 原理開發(fā),，專門檢測甲型肝炎病毒的試劑盒,。它具有下列特點：

1.一站式，用于不需要單獨準(zhǔn)備每種成分,，包括引物和對照,。
2.根據(jù)甲型肝炎病毒的保守基因序列設(shè)計的引物，具有良好的特異性,。
3.基于染料法qRT-PCR檢測,，靈敏度比常規(guī)RT-PCR高10-100倍，可以達(dá)到至少1000拷貝/反應(yīng),。
4.使用一管式qRT-PCR技術(shù),，RT和PCR兩步在一個試管內(nèi)完成，不需要中間轉(zhuǎn)移樣品,，降低了操作誤差和可能的污染,。
5.本產(chǎn)品足夠50次30μL體系的RT-PCR，只能用于科研,，不能用于臨床,。

甲型肝炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒?規(guī)格及成分

編號	成份	規(guī)格
試劑一	2×qRT-PCR 緩沖液	500 μL（棕色管）
試劑二	10×qRT-PCR酶混合液	100 μL（紅蓋）
試劑三	ROX染料I	50 μL（棕色管）
試劑四	ROX染料II	50 μL（棕色管）
試劑五	熒光PCR模板稀釋液	1mL（亮黃蓋）
試劑六	甲型肝炎病毒染料法 qRT-PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑七	甲型肝炎病毒染料法 qRT-PCR 陽性對照（1×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋）
試劑八	使用手冊	1份

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存,，保存期限為12個月,。陽性對照需要因易污染其他成分需要單獨放置。本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,，只提供RNA段作為陽性對照,。

自備試劑 樣品RNA

使用方法 一、稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的的 DNA 段作為陽性對照,。

1. 標(biāo)記 6 個離心管,，分別為 7，6,，5,，4，3,，2,。用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，用帶芯槍頭,，下同）,。

2. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(本試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用。

3. 換槍頭,，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用,。

4. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用,。

5. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照,。放冰上待用。二,、樣品 RNA 的制備

6. 如果有 N 個樣品,，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照）,，一個是 NC（樣品制備陰性對照）,。可以用 10μL 上步制備的陽性對照梯度稀釋液中的第 4 號（濃度為 1×10E4 拷貝/μL,，10μL 相當(dāng)于 1 萬拷貝）再加上一定量的水作為制備的陽性對照（加水后其總體積跟樣品一樣,，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）,。可以用水作為制備的陰性對照,。

7. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA,，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容。

三,、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系,，在樣品制備室進(jìn)行）

8. 如果只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,，1 個用于 RT-PCR 陰性對照，6 個用于 RT-PCR 陽性對照,。 9. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分：

成分	N+2個制備所得樣品	RT-PCR陰性對照	RT-PCR陽性對照（2-7管）
2×qRT-PCR 緩沖液	10μL	10μL	各10μL
甲型肝炎病毒染料法 qRTPCR 引物混合液	2μL	2μL	各2μL
50×ROX (見注)	0.4μL	0.4μL	各0.4μL
樣品制備所得RNA模板（來于第8步）	5.6μL	不加	不加
稀釋所得6個陽性對照（來于第6步）	不加	不加	各5.6μL（2號樣到2號管,，3號樣到3號管…）
10×qRT-PCR 酶混合液	2μL	2μL	2μL

10. 上機(jī)后按下面參數(shù)進(jìn)行 RT-PCR（參數(shù)可能會因儀器不同而需優(yōu)化）。

過程	溫度	時間
RT（逆轉(zhuǎn)錄）	50℃	30 min
預(yù)變性	95℃	10 min
qPCR 反應(yīng) （40 個循環(huán)）	95℃	15 sec
qPCR 反應(yīng) （40 個循環(huán)）	60℃	1 min（采集 SYBR 通道的熒光信號）
按儀器預(yù)設(shè)程序進(jìn)行溶解曲線分析

四,、數(shù)據(jù)處理
10.如果把本試劑盒用于定量檢測,，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品RNA濃度的log值，再推算出其濃度,。
11.如果把本試劑盒用于定性檢測,，只判斷陽性或陰性，則陰性對照Ct必須大于或等于40,。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,，有典型擴(kuò)增曲線，Ct值應(yīng)該小于或等于30,。對待測樣品,，如果其Ct大于或等于40則為陰性，如果小于或等于35則為陽性,。如果在35-40之間,，則重復(fù)一次。重復(fù)實驗的Ct值如果大于或等于40則為陰性,，如果小于40,，則為陽性。