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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號(hào)	XY-0330	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率,、更高的擴(kuò)增靈敏度,、更高的擴(kuò)增特異性。

土拉熱弗朗西斯菌PCR試劑盒

Francisella tularensis

產(chǎn)品及特點(diǎn)

土拉熱弗朗西斯菌（Francisella tularensis）會(huì)引起土拉桿菌病，又稱(chēng)野兔熱,，是一種自然疫源性疾病，主要感染野生嚙齒動(dòng)物并可傳染給其他動(dòng)物和人類(lèi),。感染后的主要表現(xiàn)為體溫升高,，肝、脾,、腎腫大,，充血和多發(fā)性粟粒壞死，淋巴結(jié)腫大,，并有針尖大干酪樣壞死灶,，該疾病的傳播會(huì)給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)較大的經(jīng)濟(jì)損失，因此快速檢測(cè)具有重要意義。本試劑盒根據(jù) PCR 原理開(kāi)發(fā),，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開(kāi)即用,，用戶只需要提供病毒 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,，專(zhuān)一性強(qiáng),，只擴(kuò)增土拉熱弗朗西斯菌.

3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品,。

4. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,，但只能用于科研,。

土拉熱弗朗西斯菌PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號(hào)	成分	規(guī)格
試劑一	2×PCR MagicMix	1 mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1 mL（亮黃色）
試劑三	土拉熱弗朗西斯菌 PCR 引物混合物	100 μL（白蓋）
試劑四	土拉熱弗朗西斯菌 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（1×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋）
試劑五	天凈沙核酸釋放劑	20 次（1mL，綠蓋））
試劑六	使用手冊(cè)	1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,，-20℃保存,，保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置,，不要污染其他試劑,。

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法一,、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 DNA,，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。

2. 如果有 N 個(gè)樣品,，則需要做 N+2 個(gè)提取,，包括一個(gè)樣品制備陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽(yáng)性對(duì)照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 斑點(diǎn)叉尾鮰病毒 PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 1 萬(wàn)倍稀釋液而得,，樣品制備陰性對(duì)照是直接用水,。提取結(jié)束后后得到模板 DNA 放冰上待用。

二,、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對(duì) N+2 個(gè)樣品,，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰性對(duì)照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng),。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分：

成分	N+2 個(gè) 樣品管	PCR 陰性對(duì)照	PCR 陽(yáng)性對(duì)照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
土拉熱弗朗西斯菌 PCR 引物混合液	各2 μL	2 μL	各 2 μL
N+2 個(gè)樣品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 陰性對(duì)照（水）		18 μL
PCR 陽(yáng)性對(duì)照（土拉熱弗朗西斯菌 PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 1 萬(wàn)倍稀釋液）			18 μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過(guò)程	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR 反應(yīng) （35 個(gè)循環(huán)）	95℃	15 sec
	55℃	15 sec
	72℃	10 sec
后延伸	72℃	10 min

三,、電泳檢測(cè)

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物,。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣,，不需要另外再加 loading buffer。陽(yáng)性對(duì)照必須有條帶出現(xiàn),，陰性對(duì)照必須無(wú)任何擴(kuò)增,，否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效。對(duì)沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染