鏈球菌B組染料法熒光定量PCR試劑盒

Group B Streptococcus spp.(GBS)

產(chǎn)品及特點

鏈球菌B組(Group B Streptococcus spp, GBS)能引起牛乳房炎,，嚴(yán)重危害畜牧業(yè)，因此早期被畜醫(yī)界重視,。經(jīng)過幾十年的研究,，發(fā)現(xiàn)B族鏈球菌還可引起新生兒敗血癥、肺炎,、腦膜炎,，甚至死亡,。在感染后存活的新生兒，還有可能有嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥,，包括腦積水,、智力障礙、小頭畸形,、耳聾等,。同時，B族鏈球菌還可引起孕婦感染,、引起早產(chǎn),、胎兒發(fā)育不良（低體重兒）、胎膜早破及晚期流產(chǎn),，因此快速檢測鏈球菌B組具有重要意義,。熒光定量PCR是檢測傳染性疾病的主流技術(shù)，本產(chǎn)品就是以染料法熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測鏈球菌B組的試劑盒,，它具有下列特點：

1.即開即用,，用戶只需要提供DNA模板。
2.特異性高,，引物是根據(jù)人鏈球菌B組高度保守區(qū)設(shè)計,不會擴(kuò)增其他細(xì)菌,。
3.引物和擴(kuò)增體系經(jīng)過優(yōu)化，靈敏性比常規(guī)PCR高100倍,。
4.提供無傳染性的PCR陽性對照,，便于區(qū)分假陰性樣品。
5.一管式操作,，熒光PCR檢測,，不容易產(chǎn)生環(huán)境污染。
6.本產(chǎn)品只能用于科研,，本試劑盒足夠50次20μL體系的PCR,。

鏈球菌B組染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,，-20℃保存,，保存期限為 12 個月。

自備試劑   樣品 DNA,。

使用方法 一、制備標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,，只提供無傳染性的DN段作為陽性對照。
1.標(biāo)記6個離心管,，分別為7,，6，5,，4,，3，2,。
2.用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液,，用帶芯槍頭，下同）,。
3.在7號管中加入5 μL 陽性對照（其濃度為1×10E8拷貝/μL,，試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘,，得1×10E7拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
4.換槍頭,，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
5.換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩1分鐘,，得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
6.重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
二,、樣品DNA的制備
7.用自選方法純化樣品的DNA,，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8.如果有N個樣品,，則需要進(jìn)行N+2個樣品提取,，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管,。
三,、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9.如果進(jìn)行定量分析,，則標(biāo)記N+9個PCR管,，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,，1個用于PCR陰性對照，6個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。如果做定性分析,，則6個標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品只選一個做（可以選4號，其余樣品不變）,。以下只介紹定量分析的反應(yīng)設(shè)置,。
10在標(biāo)記管中按下表加入各成分：

11.蓋上蓋子后上機(jī),，按下面參數(shù)進(jìn)行PCR（具體PCR參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化）,。

四、熒光定量PCR反應(yīng)參數(shù)
五,、數(shù)據(jù)處理
12.設(shè)定60℃-96℃范圍的融解曲線分析,，排除假陽性。
13.如果把本試劑盒用于定量檢測,，則以陽性對照濃度的log值為橫軸,，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值,，再推算出其濃度。
14.如果把本試劑盒用于定性檢測,，只判斷陽性或陰性,，則陰性對照Ct必須大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,，有典型擴(kuò)增曲線,，Ct值應(yīng)該小于或等于30。對待測樣品,，如果其Ct大于或等于40則為陰性,，如果小于或等于35則為陽性。如果在35-40之間,，則重復(fù)一次,。重復(fù)實驗的Ct值如果大于或等于40則為陰性，如果小于40,，則為陽性