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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0235	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率,、更高的擴(kuò)增靈敏度,、更高的擴(kuò)增特異性,。

隱孢子蟲通用PCR試劑盒

Cryptosporidium spp.

產(chǎn)品及特點

隱孢子蟲(Cryptosporidium spp.)為體積微小的球蟲類寄生蟲,。廣泛存在多種脊椎動物體內(nèi)，寄生于人和大多數(shù)哺乳動物的主要為微小隱孢子蟲,，由微小隱孢子蟲引起的疾病稱隱孢子蟲病,，是一種以腹瀉為主要臨床表現(xiàn)的人畜共患性原蟲病。病程可遷延數(shù)月至 1 年,。病人常并發(fā)腸外器官隱孢子蟲病,，如呼吸道和膽道感染，使得病情更為嚴(yán)重復(fù)雜,。隱孢子蟲感染常為 AIDS 病人并發(fā) 腹瀉而死亡的原因,。因此快速準(zhǔn)確診斷隱孢子蟲具有重要意義。為此本公司基于 PCR 原理開發(fā)了本產(chǎn)品,，它具有下列特點：

1. 即開即用,，用戶只需要提供寄生蟲 DNA 模板。

2. 根據(jù)隱孢子蟲保守序列設(shè)計的專一性引物,，與其他微生物無交叉反應(yīng)

3. 提供陽性對照,，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研,。

隱孢子蟲通用PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.	1 mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1 mL（亮黃蓋）
試劑三	隱孢子蟲PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	隱孢子蟲 PCR 陽性對照（1×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋））
試劑五	天凈沙核酸釋放劑試用裝	20 次（1mL，綠蓋）
試劑六	使用手冊	1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,，-20℃保存,，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置,，不要污染其他試劑,。

自備試劑樣品 DNA。

使用方法 一,、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 DNA,，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。

2. 如果有 N 個樣品,，則需要做 N+2 個提取,，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 芽孢桿菌通用 PCR 陽性對照的 10000 倍稀釋液而得,，樣品制備陰性對照是直接用水,。提取結(jié)束后后得到模板 DNA 放冰上待用。

二,、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品,，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性對照,，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng)。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分：

成分	N+2個樣品管	PCR陰性對照	PCR陽性對照
PCR Magic Mix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μL
隱孢子蟲PCR引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2 個樣品 DNA 模板	各 18 μL
樣品制備陰性對照（超純水）		18 μL	-
隱孢子蟲 PCR 的 1 千倍稀釋液	-		18 μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過程	溫度	時間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR反應(yīng) （35個循環(huán)）	95℃	15 sec
	55℃	15 sec
	72℃	60 sec
后延伸	72℃	10 min

三,、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物,。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣,，不需要另外再加 loading buffer,。PCR 產(chǎn)物陽性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴(kuò)增,，否則實驗無效,。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染,。