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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0223	應用領域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度,、更高的擴增特異性,。

牛腎盂腎炎棒桿菌PCR試劑盒

Corynebacterium renale

產(chǎn)品及特點

腎棒狀桿菌(Corynebacterium renale)革蘭氏染色陽性,，為球桿狀或棍棒狀,，呈單在、成叢或柵欄樣排列,。細菌性腎盂腎炎由腎棒狀桿菌引起,，主要發(fā) 生于母牛，公牛少見,，馬和綿羊偶可發(fā)生,。本病為尿源性感染，因此病原菌經(jīng) 尿道生殖道口感染后,，先引起尿道炎,、膀胱炎，然后再逆行導致腎盂腎炎,。由于腎組織損傷與尿液滯留,，終病畜可因尿毒癥而死亡。病牛主要表現(xiàn)發(fā)熱,，食欲不振,，尿頻，尿少,，尿因混有黏液,、膿液、大量蛋白質(zhì),、膿細胞和白細胞,、脫落的上皮細胞等而渾濁帶血色。尿液涂片或細菌培養(yǎng)可發(fā)現(xiàn) 病原菌,。嚴重病例常發(fā)生尿毒癥,。因此牛腎盂腎炎棒桿菌檢測具有重要的意義。本試劑盒根據(jù) PCR 原理開發(fā),，它具有下列特點：：

1. 即開即用,，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,，專一性強,，只擴增牛腎盂腎炎棒桿菌。

3. 提供陽性對照,，便于區(qū)分假陰性樣品,。

4. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,，但只能用于科研,。

牛腎盂腎炎棒桿菌PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.	1 mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1 mL（亮黃蓋）
試劑三	牛腎盂腎炎棒桿菌PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	牛腎盂腎炎棒桿菌 PCR 陽性對照（1×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋））
試劑五	使用手冊	1 份

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存,，保存期限為一年,。陽性對照需要單獨放置，不要污染其他試劑,。

自備試劑樣品 DNA,。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 DNA,，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容,。

2. 如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個提取,，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照,。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 芽孢桿菌通用 PCR 陽性對照的 10000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水,。提取結(jié)束后后得到模板 DNA 放冰上待用,。

二、設置 PCR 反應（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品,，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性對照,，故需要設置 N+4 個反應。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分：

成分	N+2個樣品管	PCR陰性對照	PCR陽性對照
PCR Magic Mix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μL
牛腎盂腎炎棒桿菌 PCR引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2個樣品DNA模板	各18 μL	-	-
樣品制備陰性對照	-	18 μL	-
樣品制備陽性對照	-	-	18 μL

4. 按下表設置 PCR 反應：

過程	溫度	時間
預變性	95℃	5 min
PCR反應（35個循環(huán)）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	30 sec
后延伸	72℃	10 min

三,、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物,。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物,。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴增結(jié)束后可以直接上樣,，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn),，陰性對照必須無任何擴增,，否則實驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品,，可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染,。