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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號(hào)	XY-0216	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度,、更高的擴(kuò)增特異性,。

破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌PCR試劑盒

Clostridium tetani

產(chǎn)品及特點(diǎn)

破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌（Clostridium tetani）是引起破傷風(fēng)的病原菌,，大量存在于人和動(dòng)物腸道中,，由糞便污染土壤后經(jīng)傷口感染引起疾病。本菌繁殖體抵抗力與其他細(xì)菌相似,，但其芽孢抵抗力強(qiáng)大,。在土壤中可存活數(shù)十年，能耐煮沸 40-50 min,。對(duì)青霉素敏感,，磺胺類(lèi)有抑菌作用。本產(chǎn)品是根據(jù) PCR 原理開(kāi)發(fā)檢測(cè)破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌的試劑盒,，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開(kāi)即用,，用戶(hù)只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,，專(zhuān)一性強(qiáng),，只擴(kuò)增傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌，但跟其他微生物無(wú)交叉反應(yīng),。

3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳,。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研,。

破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號(hào)	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1 mL（亮黃蓋）
試劑三	破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌 PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（1×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋））
試劑五	使用手冊(cè)	1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,，-20℃保存，保存期限為一年,。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置,，不要污染其他試劑。

自備試劑樣品 DNA,。

使用方法 一,、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容,。

2. 如果有 N 個(gè)樣品,，則需要做 N+2 個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照,。樣品制備陽(yáng)性對(duì)照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 芽孢桿菌通用 PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 10000 倍稀釋液而得,，樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后后得到模板 DNA 放冰上待用,。

二,、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對(duì) N+2 個(gè)樣品,，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰性對(duì)照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng),。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分：

成分	樣品管 N+2 個(gè)	PCR 陰性對(duì)照管	PCR 陽(yáng)性對(duì)照
PCR Magic Mix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μLL
破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌PCR引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2 個(gè)樣品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 陰性對(duì)照（超純水）		18 μL
PCR 陽(yáng)性對(duì)照（破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌 PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 10 倍稀釋液）			18 μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過(guò)程	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR反應(yīng) （35個(gè)循環(huán)）	95℃	15 sec
	57℃	15 sec
	72℃	40 sec
后延伸	72℃	10 min

三,、電泳檢測(cè)

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物,。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物,。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣,，不需要另外再加 loading buffer,。PCR 產(chǎn)物陽(yáng) 性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無(wú)任何擴(kuò)增,，否則實(shí) 驗(yàn)無(wú)效。對(duì)沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品,，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染,。