牛腺病毒3型PCR試劑盒返回列表頁

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產(chǎn)品型號50次

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廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所在地上海

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更新時間：2020-07-24 16:48:25瀏覽次數(shù)：592次

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產(chǎn)品分類品牌分類

PCR試劑盒: PCR-染料法 PCR-探針法

全部產(chǎn)品列表

產(chǎn)品簡介

供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0132	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴增效率,、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性,。

牛腺病毒3型PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒,，根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β,、γ,、未分類皰疹病毒四個亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛,，可感染人類和其他脊椎動物,。在自然界廣泛存在，主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織,，例如：皮膚,、粘膜和神經(jīng)組織。

詳情介紹

牛腺病毒3型PCR試劑盒

Bovine Adenovirus(BAV-3)

產(chǎn)品及特點

牛腺病毒 3 型（Bovine Adenovirus Type 3,，BAV-3）,，主要引起牛的呼吸道和腸道疾病，其主要特征為肺炎,、腸炎,、結(jié)膜炎和多發(fā)性關(guān)節(jié)炎，是犢牛死亡的重要原因之一,。其易感和潛伏性給畜牧業(yè)及其貿(mào)易帶來嚴重的經(jīng)濟損失,。此外牛血清的質(zhì)量控制標準中有一項重要的指標是病毒的檢測，其中就有 BAV-3,，因為它能給細胞培養(yǎng) 帶來干擾,。為此，本公司根據(jù)熒光定量 PCR 原理,，開發(fā)了本產(chǎn)品,。它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品,。

2. 根據(jù)牛腺病毒 3 型保守序列設(shè)計的專一性引物,，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。

3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應(yīng),。

4. 一管式熒光定量 PCR 檢測,，避免后續(xù)污染。

5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR,。

6. 本產(chǎn)品只適用于科研,，不能用于臨床診斷。

牛腺病毒3型PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成分	規(guī)格
試劑一	2×qPCR MagicMix	500μL（棕色管）
試劑二	熒光 PCR 模板稀釋液	1 mL（黃蓋）
試劑三	牛腺病毒 3 型 PCR 引物混合物	100 μL（白蓋）
試劑四	牛腺病毒 3 型 PCR 陽性對照 (1×10E8 拷貝/μL)	50 μL（黃蓋））
試劑五	天凈沙核酸釋放劑（試用裝）	20 次（1 mL，綠蓋）
試劑六	使用手冊	1 份

運輸及保存 低溫運輸,、-20℃保存,，有效期一年。

自備試劑 DNA 模板,、10×ROX（根據(jù)機型決定,，具體見使用方法）。

使用方法 一,、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽性對照,。

2. 標記 6 個離心管,，分別為 7，6,，5,，4，3,，2,。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）,。

4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用,。

5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用,。

6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用,。

7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照,。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

8. 如果有 N 個樣品,，必須設(shè)置 N+2 個提取,，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）,?？梢杂?10μL 上步制備的 PCR 陽性對照的第 4 號（濃度為 1×10E4 拷貝/μL，10μL 相當于 1 萬拷貝）或第 5 號（濃度為 1×10E5 拷貝/μL,，10μL 相當于 10 萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,，以此作為 PC。另外用水作為 NC,。如果每次制備需要 200μL 樣品,，則 PC 和 NC 的體積也必須是 200μL。

9. 用自選方法純化樣品的 DNA,，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容,。

三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20 μL 體系,，在樣品制備室進行）

10. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,，1 個用于 PCR 陰性對照,，6 個用于標準曲線。如果做定性分析,，并且只做 1 次重復,，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板）,，1 個用于 PCR 陽性對照（用第 4 號陽性對照稀釋液，濃度為 10000 拷貝/μL）,。下面只描述定量分析的步驟,，定性分析只是把 6 個標曲反應(yīng)縮減成 1 個，其余不變,。

11. 在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復,。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后后加）：

成分	樣品管 N+2 個	PCR 陰性對照管	PCR 陽性對照管（2-7 管）
2×qPCR MagicMix	10 μL	10 μL	各10 μL
牛腺病毒 3 型 PCR 引物混合液	2 μL	2 μL	各2 μL
自備 10×ROX (見注)	2 μL	2 μL	各 2 μL
N+2 待測樣品 DNA 模板）	6 μL
第 7 步所得 PCR 陽性對照稀釋液（2-7 號）			各 6μL（2 號樣到 2 號管,，3 號樣到 3 號管…）

12. 蓋上蓋子后上機,，按下面參數(shù)進行 PCR（具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化）。

過程	溫度	時間
預變性	95℃	3 分鐘
PCR反應(yīng) （40 個循環(huán)）	95℃	30 秒
PCR反應(yīng) （40 個循環(huán)）	60℃	60 秒

四,、數(shù)據(jù)處理

13. 如果把本試劑盒用于定量檢測,，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標準曲線,。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,，再推算出其濃度。

14. 如果把本試劑盒用于定性檢測,，只判斷陽性或陰性,，則陰性對照 Ct 必須大于或等于 35。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,，有典型擴增曲線,，Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對待測樣品,，如果其 Ct 大于或等于 35 則為陰性,，如果小于或等于 30 則為陽性。如果在 30-35 之間,，則重復一次,。重復實驗的 Ct 值如果大于或等于 35 則為陰性，如果小于 30,，則為陽性,。