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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0127	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率,、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性,。

禽波氏桿菌PCR試劑盒

Bacteria

產(chǎn)品及特點

波氏桿菌病是由禽波氏桿菌引起的一種細(xì)菌性傳染病，該病主要造成雞胚胎死亡,。雞波氏桿菌也可造成鴨,、鵝等其它禽類發(fā)病，但成年種雞基本無異常現(xiàn)象,，個別出現(xiàn)拉綠便,、眼流淚、氣喘等癥狀,。但種雞所產(chǎn)種蛋孵化率降低,、死胚增多，死胚多發(fā)生在 18 日齡前后,，死胚率一般在 30%-40%,，有的高達(dá) 60%。同時,，種蛋孵出的弱雛增多,，弱雛率在 5%-20%，雛雞多在 3-5 日齡發(fā) 病,，表現(xiàn)為呼吸困難,，食欲降低或廢絕，精神沉郁,，呆立一隅,，常急性死亡。因此快速靈敏檢測禽波氏桿菌具有重要意義,。本產(chǎn)品就是為此目的根據(jù) PCR 原理開發(fā)的試劑盒,，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板,。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增禽波氏桿菌,，與其他微生物沒有交叉反應(yīng)

3. 提供陽性對照,，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳,。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,，但只能用于科研。

禽波氏桿菌PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1 mL（亮黃色）
試劑三	禽波氏桿菌 PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	禽波氏桿菌 PCR 陽性對照（1×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋））
試劑五	天凈沙核酸釋放劑（試用裝）	20 次（1 mL,，綠蓋）
試劑六	使用手冊	1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,，-20℃保存，保存期限為一年,。陽性對照需要單獨(dú)放置,，不要污染其他試劑。

自備試劑樣品 DNA,。

使用方法 一,、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容,。

2. 如果有 N 個樣品,，則需要做 N+2 個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照,。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 芽孢桿菌通用 PCR 陽性對照的 10000 倍稀釋液而得,，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后后得到模板 DNA 放冰上待用,。

二,、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性對照,，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng),。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分：

成分	樣品管 N+2 個	PCR 陰性對照管	PCR 陽性對照
PCR Magic Mix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μLL
禽波氏桿菌PCR引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2 個樣品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 陰性對照（水）		18 μL
PCR 陽性對照（禽波氏桿菌 PCR 陽性對照的 10000 倍稀釋液）			18 μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過程	溫度	時間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR反應(yīng) （35個循環(huán)）	95℃	15 secc
	57℃	15 sec
	72℃	40 sec
后延伸	72℃	10 min

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物,。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物,。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer,。PCR 產(chǎn)物陽性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn),，陰性對照必須無任何擴(kuò)增，否則實驗無效,。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品,，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。