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產(chǎn)品型號50次

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廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所在地上海

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更新時間：2020-07-23 16:09:42瀏覽次數(shù)：487次

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產(chǎn)品分類品牌分類

PCR試劑盒: PCR-染料法 PCR-探針法

全部產(chǎn)品列表

產(chǎn)品簡介

供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0092	應用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴增效率,、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性,。

巴貝斯屬蟲通用染料法熒光定量PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒，根據(jù)其理化性質(zhì)分 α,、β、γ,、未分類皰疹病毒四個亞科,。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛，可感染人類和其他脊椎動物,。在自然界廣泛存在,，主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織，例如：皮膚,、粘膜和神經(jīng)組織,。

詳情介紹

巴貝斯屬蟲通用染料法熒光定量PCR試劑盒

Babesia spp.

產(chǎn)品及特點

巴貝斯蟲病，是由巴貝斯蟲引起的人的血液原蟲病,，是一種人畜共患病,。自 1957 年 Skrabalo 和 Deanovic 在南斯拉夫報告一個人體病例以來，截止 1984 年,，報道人的病例已超過 100 例,。早期報道的歐洲病例大多數(shù)是由于其它原因切除了脾臟而引起的，其癥狀較為嚴重,，常為致命性的,。因此巴貝斯屬蟲的快速準確鑒定有著重要作用。本公司開發(fā)巴貝斯屬蟲通用染料法熒光定量 PCR 試劑盒,，它具有下列特點：

1. 即開即用,，用戶只需要提供病毒樣品,。

2. 引物根據(jù)巴貝斯屬蟲專一區(qū)設(shè)計，特異性高,。

3. 熒光定量 PCR 檢測,，比常規(guī) PCR 更加靈敏。

4. 一管式閉管操作,，降低了交叉污染,。

5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR。

6. 本產(chǎn)品只適用于科研,，不能用于臨床診斷,。

巴貝斯屬蟲通用染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成分	規(guī)格
試劑一	2×PCR MagicMix	0.5 mL（棕色）
試劑二	熒光 PCR 模板稀釋液	1 mL（黃蓋）
試劑三	巴貝斯屬蟲通用染料法 PCR 引物混合物	100 μL（白蓋）
試劑四	巴貝斯屬蟲通用染料法 PCR 陽性對照 (1×10E8 拷貝/μL)	50 μL（紅蓋）
試劑五	使用手冊	1 份

運輸及保存 低溫運輸、-20℃保存,，有效期一年,。

自備試劑樣品 DNA。

使用方法 一,、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽性對照,。

2. 標記 6 個離心管,，分別為 7，6,，5,，4，3,，2,。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）,。

4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用,。

5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭,，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用,。

7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用,。

二,、樣品 DNA 的制備

8. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取,，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照）,，一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 上步制備的 PCR 陽性對照的第 4 號（濃度為 1×10E4 拷貝/μL,，10μL 相當于 1 萬拷貝）或第 5 號（濃度為 1×10E5 拷貝/μL，10μL 相當于 10 萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,，以此作為 PC,。另外用水作為 NC。如果每次制備需要 200μL 樣品,，則 PC 和 NC 的體積也必須是 200μL,。

9. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容,。

三,、設(shè)置 qPCR 反應（20 μL 體系，在樣品制備室進行）

10. 如果只做 1 次重復,，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,，1 個用于 PCR 陰性對照,，6 個用于 PCR 陽性對照。如果做 2-3 次重復,，則反應設(shè)置數(shù)量相應增加 2 或 3 倍,。

11. 在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后后加）：

成分	樣品管 N+2 個	PCR 陰性對照管	PCR 陽性對照管（2-7 管）
2×qPCR MagicMix （棕色管）	10 μL	10 μL	各 10 μL
巴貝斯屬蟲通用染料法 PCR 引物混合液（白蓋）	2 μL	2 μL	各 2 μL
自備 10×ROX (見注)	2 μL	2 μL	各 2 μL
N+2 待測樣品 cDNA 模板	6 μL
第 7 步所得標準曲線樣品稀釋液（2-7 號）			各 6μL（2 號樣到 2 號管,，3 號樣到 3 號管…）

12. 蓋上蓋子后上機，按下面參數(shù)進行 PCR（具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化）,。

過程	溫度	時間
預變性	95℃	5 min
PCR 反應（30 個循環(huán)）	95℃	15 sec
PCR 反應（30 個循環(huán)）	60℃	1 min,，（采集 SYBR 通道的熒光信號）

按儀器預設(shè)程序進行熔解曲線分析

四、數(shù)據(jù)處理

13. 如果把本試劑盒用于定量檢測,，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,，以 Ct 值為縱軸,，繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 cDNA 濃度的 log 值,，再推算出其濃度,。

14. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性,，則陰性對照 Ct 必須大于或等于 36,。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴增曲線,，Ct 值應該小于或等于 30,。對待測樣品，如果其 Ct 大于或等于 35 則為陰性,，如果小于或等于 30 則為陽性,。如果在 30-35 之間，則重復一次,。若重復結(jié)果 Ct 值小于 35,，擴增曲線有明顯起峰，該樣本判斷為陽性,，否則為陰性,。