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產(chǎn)品型號50次

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所在地上海

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更新時(shí)間：2020-07-23 15:46:52瀏覽次數(shù)：579次

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產(chǎn)品分類品牌分類

PCR試劑盒: PCR-染料法 PCR-探針法

全部產(chǎn)品列表

產(chǎn)品簡介

供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0088	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率,、更高的擴(kuò)增靈敏度,、更高的擴(kuò)增特異性,。

禽輪狀病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒會(huì)引起鮑病毒病,，危害的主要對象是我國南方養(yǎng)殖的九孔鮑,、雜色鮑,，北方地區(qū)養(yǎng)殖的皺紋盤鮑。該病潛伏期短,，發(fā)病急,，傳染性強(qiáng)，死亡率高,，造成鮑種苗及成鮑的大量死亡,，4～30d 內(nèi)死亡率高達(dá) 95%以上，溶藻膠弧菌和副溶血弧菌可能會(huì)和病毒共同感染鮑并且是鮑病的共同致病因子,。

詳情介紹

禽輪狀病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

Avian Rotavirus(ARV)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

禽輪狀病毒(Avian Rotavirus,，ARV)會(huì)引起雞輪狀病毒病，患雞在臨床癥狀上差異較大,，從非常輕微的腹瀉到病雞精神委頓,、嗜睡、爆發(fā)性腹瀉下痢,、病雞脫水,，廢食。感染禽群的發(fā)病率高,，死亡率約4%～20%,。幸存者則生長緩慢。產(chǎn)蛋雞群感染病毒4～9天后,，產(chǎn)蛋量下降,。本病的防治主要是通過消毒及飼養(yǎng)管理來防控，目前尚無有效的藥物進(jìn)行治療,，也沒有研制出疫苗,，因此靈敏快捷的診斷產(chǎn)品具有重要的意義。本產(chǎn)品基于PCR原理開發(fā),。它具有下列特點(diǎn)：

1.一站式,，用于不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分，包括引物和對照,。
2.根據(jù)禽輪狀病毒的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物,，具有良好的特異性。
3.基于染料法qRT-PCR檢測,，靈敏度比常規(guī)RT-PCR高10-100倍,，可以達(dá)到至少1000拷貝/反應(yīng)。
4.使用一管式qRT-PCR技術(shù),，RT和PCR兩步在一個(gè)試管內(nèi)完成,，不需要中間轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染,。
5.本產(chǎn)品足夠50次30μL體系的RT-PCR,，只能用于科研,，不能用于臨床,。

禽輪狀病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成份	規(guī)格
試劑一	2×qRT-PCR 緩沖液	500 μL（棕色管）
試劑二	10×qRT-PCR酶混合液	100 μL（紅蓋）
試劑三	ROX染料I	50 μL（棕色管）
試劑四	ROX染料II	50 μL（棕色管）
試劑五	熒光PCR模板稀釋液	1mL（亮黃蓋）
試劑六	禽輪狀病毒RT-PCR引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑七	禽輪狀病毒RT-PCR陽性對照（1×10E8拷貝/μL）	50 μL（黃蓋）
試劑八	天凈沙核酸釋放劑試用裝	20次（1mL,，綠蓋）
試劑九	使用手冊	1份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存,，保存期限為12個(gè)月,。陽性對照需要因易污染其他成分需要單獨(dú)放置。本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,，只提供DNA段作為陽性對照,。

自備試劑 樣品RNA

使用方法 一、稀釋陽性對照（以10E2-10E7這6個(gè)10倍稀釋度為例,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,。
1.標(biāo)記6個(gè)離心管,，分別為7，6,，5,，4，3,，2,。用帶芯槍頭分別加入45 μL 熒光PCR模板稀釋液，用帶芯槍頭,，下同）,。
2.在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照(本試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘,，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照,。放冰上待用。
3.換槍頭,，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照,。放冰上待用,。
4.換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩1分鐘,，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用,。重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對照,。放冰上待用,。
二、樣品RNA的制備
5.如果有N個(gè)樣品,，必須設(shè)置N+2個(gè)提取,，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對照）,?？梢杂?0μL上步制備的陽性對照梯度稀釋液中的第4號（濃度為1×10E4拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）再加上一定量的水作為制備的陽性對照（加水后其總體積跟樣品一樣,，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）,。可以用水作為制備的陰性對照,。
6.用自選方法純化N+2個(gè)樣品的RNA,，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒RNA提取試劑盒兼容。
三,、設(shè)置RT-PCR反應(yīng)（20μL體系,，在樣品制備室進(jìn)行）
7.如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,，1個(gè)用于PCR陰性對照，6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如果做定性分析,，并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+4個(gè)PCR管,，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,，1個(gè)用于PCR陰性對照（用水做模板），1個(gè)用于PCR陽性對照（用第4號陽性對照稀釋液做模板）,。下面只描述定量分析的步驟,，定性分析只是把6個(gè)標(biāo)曲反應(yīng)縮減成1個(gè)，其余不變,。
8.在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù),。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子后后加）：

成分	N+2個(gè)制備所得樣品	RT-PCR陰性對照	RT-PCR陽性對照（2-7管）
2×qRT-PCR 緩沖液	10μL	10μL	各10μL
禽輪狀病毒RT-PCR 引物混合物	2μL	2μL	各2μL
50×ROX (見注)	0.4μL	0.4μL	各0.4μL
樣品制備所得RNA模板（來于第8步）	5.6μL	不加	不加
稀釋所得6個(gè)陽性對照（來于第6步）	不加	不加	各5.6μL（2號樣到2號管,，3號樣到3號管…）
10×qRT-PCR 酶混合液	2μL	2μL	2μL

9.上機(jī)后按下面參數(shù)進(jìn)行RT-PCR（參數(shù)可能會(huì)因儀器不同而需優(yōu)化）,。

過程	溫度	時(shí)間
RT（逆轉(zhuǎn)錄）	50℃	15-30分鐘
預(yù)變性	94℃	2分鐘
RT - PCR反應(yīng) （30個(gè)循環(huán)）	95℃	15 秒
	60℃	15 秒（采集FAM通道的熒光信號）
	72℃	15 秒
按儀器預(yù)設(shè)程序進(jìn)行溶解曲線分析

四、數(shù)據(jù)處理
10.如果把本試劑盒用于定量檢測,，則以陽性對照濃度的log值為橫軸,，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值,，再推算出其濃度,。
11.如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性,，則陰性對照Ct必須大于或等于40,。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴(kuò)增曲線,，Ct值應(yīng)該小于或等于30,。對待測樣品,，如果其Ct大于或等于40則為陰性,，如果小于或等于35則為陽性。如果在35-40之間,，則重復(fù)一次,。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的Ct值如果大于或等于40則為陰性，如果小于40,，則為陽性,。