禽類支原體通用PCR試劑盒

Avian Mycoplasma spp.

產(chǎn)品及特點(diǎn)

禽支原體病是由禽類支原體（Avian Mycoplasma spp.）引起的家禽的一 種傳染病,，主要包括雞敗血支原體病、雞傳染性滑液膜炎和火雞支原體病,。禽 支原體病幾乎在世界各地都有發(fā)生,，已成為雞群和火雞群的一個(gè)重要問題。危 害的雞只達(dá) 13%以上，使其體重減少 38%,，飼料轉(zhuǎn)化率降低 21%,。在火雞中， 可引起竇炎,、氣囊炎和以高死亡率為特征的傳染性竇炎,。本試劑盒是根據(jù) PCR 原理開發(fā)，具有下列特點(diǎn)： 

1. 免 DNA 制備,，直接用裂解液做 PCR,，更加簡單快捷。

2. 根據(jù)禽類支原體保守區(qū)設(shè)計(jì)引物,。

3. 特異性高,，跟其他微生物無交叉反應(yīng)。

4. 靈敏高,，可檢測低至幾個(gè)拷貝/反應(yīng)的支原體污染,。

5. 提供內(nèi)參和無感染性的支原體陽性對照（DNA 段），能有效避免實(shí)驗(yàn)結(jié) 果的假陽性和假陰性,。

6. 可用于培養(yǎng)細(xì)胞、疫苗,、血清,、重組蛋白和耗材的污染檢測。但不能用于 臨床診斷,。

7. 本產(chǎn)品足夠至少 50 次 40μL 體系 PCR 檢測(含陽性對照和陰性對照反應(yīng)),。

禽類支原體通用PCR試劑盒規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,，-20℃保存,，保存期限為一年。陽性對照需要單獨(dú)放置,，不要污染其 他試劑,。  

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一,、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個(gè)樣品,，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽 性對照）,，一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對照）,。可以用 10μL 陽性對照的 10000 倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,， 以此作為 PC,。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸純化試劑盒兼 容,。

二,、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對 N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽性對照和一個(gè) PCR 陰性 對照,，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng),。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物,。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物,。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer,。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn),，陰性對照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效,。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品,，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。