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產(chǎn)品型號50次

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廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所在地上海

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更新時間：2020-07-22 16:58:48瀏覽次數(shù)：526次

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產(chǎn)品分類品牌分類

PCR試劑盒: PCR-染料法 PCR-探針法

全部產(chǎn)品列表

產(chǎn)品簡介

供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0069	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴增效率,、更高的擴增靈敏度,、更高的擴增特異性,。

禽偏肺病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒會引起鮑病毒病,，危害的主要對象是我國南方養(yǎng)殖的九孔鮑,、雜色鮑,，北方地區(qū)養(yǎng)殖的皺紋盤鮑,。該病潛伏期短,，發(fā)病急,，傳染性強，死亡率高,，造成鮑種苗及成鮑的大量死亡,，4～30d 內(nèi)死亡率高達 95%以上，溶藻膠弧菌和副溶血弧菌可能會和病毒共同感染鮑并且是鮑病的共同致病因子,。

詳情介紹

禽偏肺病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

Avian Metapneumovirus(aMPV)

產(chǎn)品及特點

禽偏肺病毒(Avian Metapneumovirus,，aMPV)會引起禽類的呼吸道感染，該病傳播迅速,，發(fā)病率高,，死亡率不定（火雞的死亡率可能較高）；出現(xiàn)打噴嚏,、羅音,、鼻竇炎、結(jié)膜炎,、眼部有分泌物,、鼻漏，以及蛋禽產(chǎn)蛋下降等臨床癥狀,，該病的發(fā)生會給養(yǎng)殖業(yè)造成較大的經(jīng)濟損失，因此靈敏快捷的診斷產(chǎn)品具有重要的意義,。本產(chǎn)品基于PCR原理開發(fā),。它具有下列特點：

1.一站式，用于不需要單獨準備每種成分,，包括引物和對照,。
2.根據(jù)星狀病毒的保守基因序列設(shè)計的引物，具有良好的特異性,。
3.基于染料法qRT-PCR檢測,，靈敏度比常規(guī)RT-PCR高10-100倍，可以達到至少1000拷貝/反應(yīng),。
4.使用一管式qRT-PCR技術(shù),，RT和PCR兩步在一個試管內(nèi)完成，不需要中間轉(zhuǎn)移樣品,，降低了操作誤差和可能的污染,。
5.本產(chǎn)品足夠50次30μL體系的RT-PCR，只能用于科研,，不能用于臨床,。

禽偏肺病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成分	規(guī)格
試劑一	2×qRT-PCR 緩沖液	500 μL（棕色管）
試劑二	10×qRT-PCR酶混合液	100 μL（紅蓋
試劑三	ROX染料I	50 μL（棕色管）
試劑四	ROX染料II	50 μL（棕色管）
試劑五	熒光PCR模板稀釋液	1mL（亮黃蓋）
試劑六	禽偏肺病毒RT-PCR引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑七	禽偏肺病毒RT-PCR陽性對照（1×10E8拷貝/μL）	50 μL（黃蓋）
試劑八	天凈沙核酸釋放劑試用裝	20次（1mL，綠蓋）
試劑九	使用手冊	1份

運輸及保存 低溫運輸,，-20℃保存,，保存期限為12個月,。陽性對照需要因易污染其他成分需要單獨放置。本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,，只提供DNA段作為陽性對照,。

自備試劑 樣品RNA

使用方法 一、稀釋陽性對照（以10E2-10E7這6個10倍稀釋度為例,。由于標準品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,。
1.標記6個離心管,，分別為7，6,，5,，4，3,，2,。用帶芯槍頭分別加入45 μL 熒光PCR模板稀釋液，用帶芯槍頭,，下同）,。
2.在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照(本試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘,，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照,。放冰上待用。
3.換槍頭,，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照,。放冰上待用,。
4.換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩1分鐘,，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用,。重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照,。放冰上待用。
二,、樣品RNA的制備
5.如果有N個樣品,，必須設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）,?？梢杂?0μL上步制備的陽性對照梯度稀釋液中的第4號（濃度為1×10E4拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）再加上一定量的水作為制備的陽性對照（加水后其總體積跟樣品一樣,，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）,。可以用水作為制備的陰性對照,。
6.用自選方法純化N+2個樣品的RNA,，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒RNA提取試劑盒兼容。
三,、設(shè)置RT-PCR反應(yīng)（20μL體系,，在樣品制備室進行）
7.如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標記N+9個PCR管,，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,，1個用于PCR陰性對照，6個用于標準曲線,。如果做定性分析,，并且只做1次重復(fù)，則標記N+4個PCR管,，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），1個用于PCR陽性對照（用第4號陽性對照稀釋液做模板）,。下面只描述定量分析的步驟,，定性分析只是把6個標曲反應(yīng)縮減成1個，其余不變,。
8.在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,，陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子后后加）：

成分	N+2個制備所得樣品	RT-PCR陰性對照	RT-PCR陽性對照（2-7管）
2×qRT-PCR 緩沖液	10μL	10μL	各10μL
禽偏肺病毒RT-PCR 引物混合物	2μL	2μL	各2μL
50×ROX (見注)	0.4μL	0.4μL	各0.4μL
樣品制備所得RNA模板（來于第8步）	5.6μL	不加	不加
稀釋所得6個陽性對照（來于第6步）	不加	不加	各5.6μL（2號樣到2號管,，3號樣到3號管…）
10×qRT-PCR 酶混合液	2μL	2μL	2μL

9.上機后按下面參數(shù)進行RT-PCR（參數(shù)可能會因儀器不同而需優(yōu)化）。

過程	溫度	時間
RT（逆轉(zhuǎn)錄）	50℃	15-30分鐘
預(yù)變性	94℃	2分鐘
RT - PCR反應(yīng) （30個循環(huán)）	95℃	15 秒
	60℃	15 秒（采集FAM通道的熒光信號）
	72℃	15 秒
按儀器預(yù)設(shè)程序進行溶解曲線分析

四,、數(shù)據(jù)處理
10.如果把本試劑盒用于定量檢測,，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸,，繪制標準曲線,。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度,。
11.如果把本試劑盒用于定性檢測,，只判斷陽性或陰性，則陰性對照Ct必須大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,，有典型擴增曲線,，Ct值應(yīng)該小于或等于30。對待測樣品,，如果其Ct大于或等于40則為陰性,，如果小于或等于35則為陽性。如果在35-40之間,，則重復(fù)一次,。重復(fù)實驗的Ct值如果大于或等于40則為陰性，如果小于40,，則為陽性,。