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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0067	應用領域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產業(yè),農林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴增效率,、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性,。

禽傳染性支氣管炎病毒通用RT-PCR試劑盒

Avian Infectious Bronchitis Virus(AIBV)

產品及特點

禽傳染性支氣管炎病毒(Avian Infectious Bronchitis Virus,，AIBV)會引起雞傳染性支氣管炎,，主要傳播方式是病鳥從呼吸道排出病毒，經空氣飛沫傳染給易感鳥,，此外可通過被污染的飼料,、飲水、籠具等經消化道傳染,。過熱,、嚴寒、擁擠,、通風不好及維生素,、礦物質供應不足均可促使本病發(fā)生，該病的發(fā)生會給養(yǎng)殖業(yè)造成較大的經濟損失,，因此靈敏快捷的診斷產品具有重要的意義,。本產品基于 PCR 原理開發(fā),它具有下列特點：

1. 一站式，用于不需要單獨準備每種成分,，包括引物和對照,。

2. 根據禽傳染支氣管炎病毒的保守基因序列設計的引物，具有良好的特異性,。

3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應,。

4. 使用一管式 RT-PCR 技術，RT 和 PCR 兩步在一個試管內完成,，不需要中間轉移樣品,，降低了操作誤差和可能的污染,。

5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。

6. 本產品只能用于科研,，不能用于臨床,。

禽傳染性支氣管炎病毒通用RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成分	規(guī)格
試劑一	5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橘黃蓋））
試劑二	MMLV-Taq Mix	75 μL（紅蓋）
試劑三	超純水	1 mL（亮黃蓋）
試劑四	禽傳染支氣管炎病毒通用 RT-PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑五	禽傳染支氣管炎病毒通用 RT-PCR 陽性對照（1×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋）
試劑六	使用手冊	1 份

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存,，保存期限為 12 個月,。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分開放置，因為其容易污染其他成分,，造成假陽性,。

自備試劑 樣品RNA

使用方法 一、樣品 RNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品,，必須設置 N+2 個提取,，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照）,，一個是 NC（樣品制備陰性對照）,。可以用 10μL 禽傳染支氣管炎病毒通用 RT-PCR 陽性對照的 100 倍稀釋的（稀釋后濃度為 1×10E6 拷貝/μL,， 10μL 相當于 1 萬拷貝,，可以將 10μL 原液加入到 990μL 自備 TE 溶液中，充分混勻,，此為 100 倍稀釋液,。）再加上一定量的水作為制備的陽性對照（加水后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）,?？梢杂?水作為制備的陰性對照。制備所得成為樣品 RNA,。

2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA,，本試劑盒跟市場上大多數病毒 RNA 提取試劑盒兼容。

二,、設置 RT-PCR 反應（20μL 體系） 3. 如果有 N+2 個樣品,，則標記 N+4 個 PCR 管（額外增加的兩個管一個是 RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

成分	N+2個制備所得樣品	RT-PCR陰性對照	RT-PCR 陽性對照管
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	各4 μL	4 μL	4 μL
禽傳染支氣管炎病毒通用 RT-PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2 個制備的 RNA 樣品)	各12.5 μL
超純水		12.5 μL
禽傳染支氣管炎病毒通用 RT-PCR 陽性對照的 100 倍稀釋液			12.5 μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4. 上機進行 RT-PCR,，RT-PCR 反應參數為:

過程	溫度	時間
逆轉錄	42℃	30 min
預變性	94℃	5 min
PCR 反應（35 個循環(huán)）	94℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	20 sec
延伸	72℃	10 min

5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果,，陽性樣品預期得到的擴增產物長度為 137bp。如果陰性對照有此擴增產物或陽性對照無此擴增產物,，則說明實驗失敗,，需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有此擴增產物,、陽性對照有此擴增產物的情況下,，才有必要分析樣品的實驗結果,，如果有此擴增產物則為陽性，如果無則為陰性,。