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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號(hào)	XY-0057	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率,、更高的擴(kuò)增靈敏度,、更高的擴(kuò)增特異性,。

曲霉屬通用PCR試劑盒

Aspergillus spp.

產(chǎn)品及特點(diǎn)

曲霉屬，曲霉目中的一屬,，包括米曲霉,、黑曲霉等。一方面有很多菌種可被用于各種有益物質(zhì)的生產(chǎn),，如用于蛋白消化劑的蛋白酶（醬油曲霉）,、檸檬酸（黑曲霉）、衣康酸（土曲霉,、解烏頭酸曲霉）以及曲酸（黃曲霉）等,。但另一方面，也有不少侵害家禽,、家畜甚至人體內(nèi)臟特別是呼吸器官的病菌,，如引起曲霉癥的煙曲霉等。因此快速靈敏檢測(cè)曲霉屬具有重要意義,。本產(chǎn)品是根據(jù) PCR 原理開發(fā)的曲霉屬通用檢測(cè)試劑盒,，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,，專一性強(qiáng),，只擴(kuò)增曲霉屬，與其他病原沒有交叉反應(yīng),。

3. 提供陽性對(duì)照,，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料,，PCR 后可以直接上樣電泳,。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研,。

曲霉屬通用PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號(hào)	成分	規(guī)格
試劑一	PCR Magic Mix 3.0	1 mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1 mL（亮黃蓋）
試劑三	曲霉屬通用 PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	曲霉屬通用 PCR 陽性對(duì)照（1×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋）
試劑五	使用手冊(cè)	1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,，-20℃保存，保存期限為一年,。陽性對(duì)照需要單獨(dú)放置,，不要污染其他試劑。

自備試劑樣品 DNA,。

使用方法 一,、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容,。

2. 如果有 N 個(gè)樣品,，則需要做 N+2 個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽性對(duì)照和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照,。樣品制備陽性對(duì)照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 曲霉屬通用 PCR 陽性對(duì)照的 100 倍稀釋液而得,，樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后后得到模板 DNA 放冰上待用,。

二,、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40 μL 體系）

3. 對(duì) N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰性對(duì)照,，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng),。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分：

成分	樣品管 N+2 個(gè)	PCR 陰性對(duì)照管	PCR 陽性對(duì)照管
PCR Magic Mix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μL
曲霉屬通用 PCR 引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2 個(gè)樣品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 陰性對(duì)照（超純水）		18 μL
PCR 陽性對(duì)照（煙曲霉 PCR 陽性對(duì) 照的 10000 倍稀釋液）			18 μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)

過程	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR 反應(yīng) （35個(gè)循環(huán)）	95℃	30 sec
	58℃	30 sec
	72℃	20 sec
后延伸	72℃	7 min

三、電泳檢測(cè)

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物,。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物,。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer,。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 471bp,。陽性對(duì)照必須有此條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無任何擴(kuò) 增,，否則實(shí)驗(yàn)無效,。對(duì)沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品,，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。