| 一,、細胞基本屬性 |
| 細胞名稱 | 293T-LUC-puro（人胚腎細胞-熒光素酶標記） |
| 細胞別稱 | 293T-LUC-puro,；人胚腎細胞株-熒光素酶標記；人胚腎細胞-LUC-puro |
| 種屬來源 | 人 |
| 組織來源 | 腎 |
| 生長特性 | 貼壁生長 |
| 細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
| 背景介紹 | Luciferase 293T細胞穩(wěn)定表達螢火蟲熒光素酶,。該細胞株性狀穩(wěn)定,，培養(yǎng)時不需要添加抗生素維持?？捎米魑灮鹣x熒光素酶活性檢測中的陽性對照,，也可用于活體動物成像實驗。 該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因,。 293T細胞是293 [HEK-293]細胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉衍生株,。 |
| puro藥篩濃度 | 該細胞puro藥篩濃度為1.0ug/ml，培養(yǎng)過程中可不用再添加puro,，如若擔心抗性隨著傳代時間降低,，可定期用0.5ug/ml濃度puro維持 |
| Luciferase活性檢測 | 
293T-LUC-PURO Luciferase檢測報告下載 |
| 細胞代數 | p3-p8 |
| 生物安全等級 | 1 |
| 細胞規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 |
| 支原體檢測 | 無 |
| 保藏機構 | ATCC; CRL-3216 DSMZ; ACC-635 |
| 培養(yǎng)基 | 90% DMEM+10% FBS+PS |
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳,；溫度：37℃ |
| 凍存條件 | 無血清凍存液，液氮儲存 |
| 細胞貨期 | 1-2周 |
| 運輸方式 | 復蘇發(fā)貨（T25瓶免運輸費用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運輸費用） 順豐快遞 |
| 供應限制 | 僅限于科學研究,，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用 |
| 特別說明 | 以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主 |
| 二、細胞培養(yǎng)操作 |
| 收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 |
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| 收貨處理 | 觀察好細胞狀態(tài)后,，75%酒精消毒瓶壁,，將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài) | 收到細胞后,，需立即轉入液氮凍存或直接復蘇 |
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| 傳代密度 | 細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng) | 第三天換液并檢查細胞密度 |
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| 傳代比例 | 傳代建議1：2傳代
1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | 一管細胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 |
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| 傳代方法 | a,、棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
b,、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞,，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-3min（視細胞消化情況而定）,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,，1000 rpm離心5 min,，棄去上清液,，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻,。
c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。 | 將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000 rpm條件下離心3 min,，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6 cm皿中,，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第三天換液并檢查細胞密度,。 |
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| 注意事項 | 1.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 2.因運輸問題,，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,，是正常現象,。 | 1.收貨時若發(fā)現干冰化完,，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細胞接種觀察,，若未融化可以將細胞按正常步驟保存,；
2.為保證細胞的高存活率，收到產品后,，請立即解凍復蘇細胞,。 |
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| 到貨須知 | 1.收到細胞后，首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現象，干冰運輸的細胞檢查干冰是否揮發(fā),，細胞是否解凍,，若有上述現象發(fā)生請及時和我們聯系。
2.靜置完成后,，取出細胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢、拍照（當天以及第 2,3 天請拍照）,，記錄細胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務依據),；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照,、記錄細胞生長狀態(tài),。 3.由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯系,，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決,。
4.仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基,、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致,，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現問題,，責任由客戶自行承擔。 |
| 三.細胞凍存操作 |
| 凍存液配方 | 無血清凍存液,，液氮儲存 |
| 細胞密度 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例 |
| 凍存方法 | a,、收集細胞及細胞培養(yǎng)液,，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min,，棄去上清液,，用PBS清洗一遍，棄盡PBS,，進行細胞計數,。
b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液,，使細胞密度5×106~1×107/mL,，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液,，注意凍存管做好標識,。
c、將凍存管放入-80℃冰箱,，24 h后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
| 注意事項 | 凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性,，若有異常,，及時調整實驗方案 |
| 四、售后服務 |
| 重發(fā)標準 | 1.細胞運輸途中遭遇的各種問題,，細胞丟失,、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等,，重發(fā),； 2.收到細胞未開封，如出現污染狀況,，重發(fā)； 3.收到細胞3天內,，發(fā)現污染問題,，經核實后，重發(fā)； 4.常溫發(fā)貨的細胞靜置 2 小時后,，干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇 2 天后,，絕大多數細胞未存活，經核實后,，重發(fā),； 5.常溫發(fā)貨的細胞靜置 22 小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇 2 天后，出現污染,，經核實后,，重發(fā)； 6.細胞活性問題,，請在收到產品 3 天內給我們提出真實的實驗結果,，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經核實后,，重發(fā),； 7.視具體情況而定。 |
| 不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細胞污染,，不重發(fā),； 2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā),； 3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,，不重發(fā)； 4.細胞狀態(tài)不好,，未提供真實清晰的培養(yǎng)前 3 天的細胞狀態(tài)照片,，不重發(fā)； 5.細胞培養(yǎng)時經其它處理導致細胞出現問題的,，不重發(fā),； 6.收到細胞發(fā)現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā),； 7.視具體情況而定,。 |
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