| 一、細(xì)胞基本屬性 |
| 細(xì)胞名稱 | 4T1-LUC-PURO（小鼠乳腺癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記） |
| 細(xì)胞別稱 | 4T1-LUC,；小鼠乳腺癌細(xì)胞-LUC,；小鼠乳腺癌細(xì)胞-株熒光素酶標(biāo)記 |
| 種屬來源 | 小鼠 |
| 組織來源 | 乳房 |
| 生長特性 | 貼壁生長 |
| 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
| 細(xì)胞代數(shù) | p3-p8 |
| 背景介紹 | Luciferase 4T1細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)螢火蟲熒光素酶。該細(xì)胞株性狀穩(wěn)定,，培養(yǎng)時(shí)不需要添加抗生素維持,。可用作螢火蟲熒光素酶活性檢測中的陽性對照,，也可用于活體動物成像實(shí)驗(yàn),。 該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。 4T1細(xì)胞是從410.4瘤株中未經(jīng)誘變篩得的6-硫鳥嘌噙抗性細(xì)胞株,。當(dāng)4T1細(xì)胞注射到BALB/c小鼠中時(shí),，4T1細(xì)胞會自發(fā)產(chǎn)生高轉(zhuǎn)移腫瘤，可轉(zhuǎn)移到肺,、肝,、淋巴結(jié)和大腦，同時(shí)在注射部位形成始發(fā)灶,，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)移時(shí)不需要摘除始發(fā)灶,。4T1細(xì)胞在BALB/c小鼠中的生長與轉(zhuǎn)移特性與人體中的乳腺癌十分相近,，這種腫瘤是人Ⅵ期乳腺癌的動物模型。4T1細(xì)胞誘導(dǎo)的腫瘤在手術(shù)后及未手術(shù)情況下轉(zhuǎn)移的動力學(xué)相近,，可以用作手術(shù)后及未手術(shù)模型,。4T1細(xì)胞誘導(dǎo)的腫瘤模型跟其他腫瘤模型相比，由于4T1細(xì)胞的抗6-硫鳥嘌噙特性,，微小的轉(zhuǎn)移細(xì)胞團(tuán)(少到僅僅1個(gè))也可以在許多遠(yuǎn)端器官中檢測到,，沒必要數(shù)淋巴結(jié)或稱重器官。 |
| puro藥篩濃度 | 該細(xì)胞puro藥篩濃度為1.0ug/ml,，培養(yǎng)過程中可不用再添加puro,，如若擔(dān)心抗性隨著傳代時(shí)間降低，可定期用0.5ug/ml濃度puro維持 |
| Luciferase活性檢測 | 
4T1-LUC Luciferase檢測報(bào)告下載 |
| 生物安全等級 | 1 |
| 細(xì)胞規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 |
| 支原體檢測 | 無 |
| 保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; CRL-2539 |
| 培養(yǎng)基 | 90%RPMI-1640+10% FBS+PS |
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳,；溫度：37℃ |
| 凍存條件 | 無血清凍存液,，液氮儲存 |
| 細(xì)胞貨期 | 1-2周 |
| 發(fā)貨方式 | 復(fù)蘇發(fā)貨（免運(yùn)輸費(fèi)用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用） 順豐快遞 |
| 供應(yīng)限制 | 僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 |
| 特別說明 | 以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 |
| 二,、細(xì)胞培養(yǎng)操作 |
| 收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 |
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| 初步平衡 | 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，放37度培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4h,，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài) | 無須平衡,，直接放入-80冰箱（不超過一周）或者液氮罐保存，建議盡早復(fù)蘇 |
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| 傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) | 第二天換液并檢查細(xì)胞密度 |
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| 傳代比例 | 傳代建議1：2傳代
1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿,。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿 | 一管細(xì)胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 |
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| 傳代方法 | a、棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b,、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，使消化液浸潤所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定）,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化,。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 | 將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液,，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 |
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| 注意事項(xiàng) | 1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。 2.因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,，是正?，F(xiàn)象。 | 1.收貨時(shí)若發(fā)現(xiàn)干冰化完,，檢查凍存管是否融化,，若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察，若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存,；
2.為保證細(xì)胞的高存活率,，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞,。 |
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| 到貨須知 | 1.收到細(xì)胞后,，首先觀察并拍照記錄細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,，干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系,。
2.靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢,、拍照（當(dāng)天以及第 2,3 天請拍照），記錄細(xì)胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)),；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。 3.由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決,。
4.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息,，如細(xì)胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基、血清比例,、所需細(xì)胞因子等,，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題,，責(zé)任由客戶自行承擔(dān),。 |
| 三.細(xì)胞凍存操作 |
| 凍存液配方 | 無血清凍存液，液氮儲存 |
| 細(xì)胞密度 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為例 |
| 凍存方法 | a、收集細(xì)胞,，裝入無菌離心管中,，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液,，用PBS清洗一遍,，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),。
b,、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL,，輕輕混勻,，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識,。
c,、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
| 注意事項(xiàng) | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常,，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案 |
| 四,、售后服務(wù) |
| 重發(fā)標(biāo)準(zhǔn) | 1.細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題,，細(xì)胞丟失、瓶身破損,、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,，重發(fā)； 2.收到細(xì)胞未開封,，如出現(xiàn)污染狀況,，重發(fā)； 3.收到細(xì)胞3天內(nèi),，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實(shí)后,，重發(fā),； 4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 2 小時(shí)后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后,，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā),； 5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 22 小時(shí)并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后,，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實(shí)后,，重發(fā),； 6.細(xì)胞活性問題，請?jiān)谑盏疆a(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā),； 7.視具體情況而定,。 |
| 不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā),； 2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好,，不重發(fā)； 3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,，不重發(fā),； 4.細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前 3 天的細(xì)胞狀態(tài)照片,，不重發(fā),； 5.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā),； 6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于3天的,，不重發(fā)； 7.視具體情況而定。 |
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