IPEC-J2-LUC-RFP(大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞永生化)

二,、細(xì)胞接收后的處理

1) 收到細(xì)胞后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于室溫放置約1h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染,，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2) 請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù),。

3) 貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在室溫中放置1h,，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況,。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL,，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理,。傳代過程中,，若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4) 細(xì)胞運(yùn)輸途中脫落操作方法：把脫落的細(xì)胞收集離心后棄上清，用PBS清洗一遍,，離心棄上清,，在離心管中加入1ml胰酶吹散消化20秒左右，加培養(yǎng)基終止消化后離心重新鋪平,，剩下的貼壁細(xì)胞就按照正常貼壁細(xì)胞傳代方法操作,。5) 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。  收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。

三、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,，棄去上清液,，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中,，加入約4 mL培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第三天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a) 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。          

b) 加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，使消化液浸潤所有細(xì)胞,，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 -3min（視細(xì)胞消化情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化,。

c) 輕輕打勻后裝入無菌離心管中,，1000 rpm離心5 min，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻,。

僅用于科研，不能用于臨床診斷,！所有產(chǎn)品僅供科研使用,，不得用于人或動物的治療等任何其他用途,，不為任何個(gè)人提供產(chǎn)品和服務(wù),。以實(shí)際收貨產(chǎn)品說明書為準(zhǔn),，網(wǎng)站說明書僅供參考。