MM28 (人眼葡萄膜黑色瘤細胞)

 二,、細胞培養(yǎng)操作

1) 復蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,，棄去上清液,，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6 cm皿中,，加入約4 mL培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第三天換液并檢查細胞密度,。 

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

a,、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次,；

b,、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化,，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中,，1000rpm離心5min,；

c、棄上清，沉淀細胞用12ml培養(yǎng)基重懸,，然后按1:2比例進行分瓶傳代,，最后放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

d,、待細胞貼壁后，觀察培養(yǎng)結果,，之后進行換液培養(yǎng)或傳代,。 

3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為例,；

a、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,，用PBS清洗細胞一次；

b,、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化,，輕輕吹打細胞使之脫落,，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min,；

c,、用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中,；

d,、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜,，24h后轉入液氮中進行長期保存,。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

三,、培養(yǎng)注意事項 

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系,。 

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息,，如細胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基,、血清比例、所需 細胞因子等,，確保細胞培養(yǎng)條件一致,，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由 客戶自行承擔,。 

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面,，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,，是正常現(xiàn)象,。觀察好細胞狀態(tài)后,，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。 

4. 貼壁細胞可以消化,，懸浮細胞直接混勻收集細胞,，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清,。加 5 mL PBS 重懸細胞,，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細胞,，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng),。 

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài),，便于和我司技術部溝通 交流,。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系,，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決,。

7. 該細胞僅供科研使用,。 

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。     收到細胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 ,。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿,。

僅用于科研,，不能用于臨床診斷,！所有產品僅供科研使用，不得用于人或動物的治療等任何其他用途,，不為任何個人提供產品和服務,。以實際收貨產品說明書為準，網站說明書僅供參考,。