一,、細胞基本屬性 |
細胞名稱 | Hepa 1-6-LUC(小鼠肝癌細胞-熒光素酶標記) |
細胞別稱 | Hepa 1-6-LUC,;小鼠肝癌細胞株-熒光素酶標記;小鼠肝癌細胞-LUC |
種屬來源 | 小鼠 |
組織來源 | 肝 |
生長特性 | 貼壁生長 |
細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
背景介紹 | Luciferase Hepa 1-6細胞穩(wěn)定表達螢火蟲熒光素酶,。該細胞株性狀穩(wěn)定,,培養(yǎng)時不需要添加抗生素維持。可用作螢火蟲熒光素酶活性檢測中的陽性對照,,也可用于活體動物成像實驗,。 該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。 Hepa 1-6細胞是C57/L小鼠中產生的BW7756小鼠肝癌的衍生株,。 |
puro藥篩濃度 | 該細胞puro藥篩濃度為1.0ug/ml,,培養(yǎng)過程中可不用再添加puro,如若擔心抗性隨著傳代時間降低,,可定期用0.5ug/ml濃度puro維持 |
生物安全等級 | 1 |
細胞規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 |
支原體檢測 | 無 |
保藏機構 | ATCC; CRL-1830 BCRC; 60051 DSMZ; ACC-175 ECACC; 92110305 |
培養(yǎng)基 | 90% DMEM+10% FBS+雙抗 |
培養(yǎng)條件 | 氣相:95%空氣+5%二氧化碳,;溫度:37℃ |
凍存條件 | 無血清凍存液,液氮儲存 |
細胞貨期 | 1-2周 |
運輸方式 | 復蘇發(fā)貨(T25瓶免運輸費用)/ 凍存發(fā)貨(需加干冰運輸費用) 順豐快遞 |
供應限制 | 僅限于科學研究,,絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用 |
二,、細胞培養(yǎng)操作 |
收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 |
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收貨處理 | 觀察好細胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁,,將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h,,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài) | 收到細胞后,需立即轉入液氮凍存或直接復蘇 |
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傳代密度 | 細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng) | 第二天換液并檢查細胞密度 |
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傳代比例 | 傳代建議1:2傳代 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿,。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | 一管細胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 |
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傳代方法 | a、棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。 b,、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,使消化液浸潤所有細胞,棄去消化液,,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。 c,、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后裝入無菌離心管中,,1000 rpm離心4 min,,棄去上清液,補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻,。 d,、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 | 將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10 cm皿中,加入約8 mL培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過夜),。第二天換液并檢查細胞密度。 |
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注意事項 | 1.運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。 2.因運輸問題,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,,是正?,F(xiàn)象。 | 1.收貨時若發(fā)現(xiàn)干冰化完,,檢查凍存管是否融化,,若已融化需直接離心細胞接種觀察,若未融化可以將細胞按正常步驟保存,; 2.為保證細胞的高存活率,,收到產品后,請立即解凍復蘇細胞,。 |
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到貨須知 | 1.收到細胞后,,首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,,干冰運輸?shù)募毎麢z查干冰是否揮發(fā),細胞是否解凍,,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系,。 2.靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,,鏡檢,、拍照(當天以及第 2,3 天請拍照),記錄細胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)),;建議細胞傳代培養(yǎng)后,,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài),。 3.由于運輸?shù)脑?,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,,請及時和我們聯(lián)系,告知細胞的具體情況,,以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決,。 4.仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,,如細胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基、血清比例,、所需細胞因子等,,確保細胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題,,責任由客戶自行承擔,。 |
三.細胞凍存操作 |
凍存液配方 | 無血清凍存液,液氮儲存 |
細胞密度 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,,可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為例 |
凍存方法 | a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液,,裝入無菌離心管中,,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,,用PBS清洗一遍,,棄盡PBS,加 1 mL血清重懸細胞,,進行細胞計數(shù),。 b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液,,使細胞密度5×106~1×107/mL,,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,,注意凍存管做好標識,。 c、將凍存管放入-80℃冰箱,,24 h后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
注意事項 | 凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性,,若有異常,及時調整實驗方案 |
四,、售后服務 |
重發(fā)標準 | 1.細胞運輸途中遭遇的各種問題,,細胞丟失,、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等,,重發(fā),; 2.收到細胞未開封,如出現(xiàn)污染狀況,,重發(fā),; 3.收到細胞3天內,發(fā)現(xiàn)污染問題,,經核實后,,重發(fā); 4.常溫發(fā)貨的細胞靜置 2 小時后,,干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇 2 天后,,絕大多數(shù)細胞未存活,經核實后,,重發(fā),; 5.常溫發(fā)貨的細胞靜置 22 小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇 2 天后,出現(xiàn)污染,,經核實后,,重發(fā); 6.細胞活性問題,,請在收到產品 3 天內給我們提出真實的實驗結果,,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,經核實后,,重發(fā),; 7.視具體情況而定。 |
不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細胞污染,,不重發(fā),; 2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā),; 3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,,不重發(fā); 4.細胞狀態(tài)不好,,未提供真實清晰的培養(yǎng)前 3 天的細胞狀態(tài)照片,,不重發(fā); 5.細胞培養(yǎng)時經其它處理導致細胞出現(xiàn)問題的,,不重發(fā),; 6.收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,不重發(fā),; 7.視具體情況而定,。 |