培養(yǎng)基的配制

一,、配制用水 
　　培養(yǎng)基的大部分是水,，所以水的質(zhì)量直接影響培養(yǎng)基的質(zhì)量,。按Waymouth標(biāo)準(zhǔn)，水的電阻應(yīng)為200萬(wàn)歐姆,，一般實(shí)驗(yàn)室里以玻璃蒸餾器制備的 
　　雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件,。 
　　二、培養(yǎng)基 
　　培養(yǎng)基有天然,、人工兩種,。一般實(shí)驗(yàn)室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基，以雙蒸或三蒸水配制,。NaHCO3（或HCl）調(diào)pH至7.2～7.4,，若pH值超 
　　過(guò)7.6或遠(yuǎn)低于6.8，則大多數(shù)細(xì)胞不能生長(zhǎng),。RPMI-1640不耐高壓滅菌,，使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過(guò)處理。 
　　三,、血清 
　　培養(yǎng)中常使用小牛血清（或胎牛血清）,。血清亦不能高壓滅菌，無(wú)菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補(bǔ)體,，置4℃冰箱存放待用,。配制時(shí)含 
　　量視培養(yǎng)細(xì)胞種類、時(shí)間而定,，一般用10—15%,。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制,，可選用無(wú)血清培養(yǎng)基,。 
　　四、抗菌素 
　　為防止培養(yǎng)時(shí)期細(xì)菌的污染,，可在培養(yǎng)基中添加適當(dāng)抗菌素,，一般用量與組織細(xì)胞培養(yǎng)相同：卡那霉素100單位/毫升,，或雙抗--青霉素100單位/ 
　　毫升，鏈霉素100微克/毫升,。 
　　五,、植物血凝素（PHA） 
　　非增殖期的細(xì)胞不能制備染色體，如人外周血淋巴細(xì)胞,，但在離體培養(yǎng)過(guò)程中,，在PHA的作用下，可被刺激轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞而進(jìn)入有絲分裂,。 
　　經(jīng)實(shí)驗(yàn)測(cè)定其分裂高峰分別于培養(yǎng)后44—48小時(shí)和68—72小時(shí),。 
　　PHA有粘多糖，蛋白質(zhì)兩種重要成分,。粘多糖促使有絲分裂,，蛋白質(zhì)起凝集作用。PHA激活的細(xì)胞數(shù)隨其濃度而增加,，直至全部免疫活性細(xì)胞均 
　　被激活為止,，但PHA濃度過(guò)高會(huì)引起凝集，一般采用4%濃度為好,。