人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞

細(xì)胞名稱     人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞 

英文名稱      

形態(tài)特性

生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)

特征特性

培養(yǎng)條件 DMEM高糖+10%FBS

傳代方法 1：2傳代

凍存條件 *培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO

支原體檢測(cè) 陰性

使用權(quán)限 A類

人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞 增殖能力取決于細(xì)胞取材,、培養(yǎng)技術(shù),、培養(yǎng)條件等綜合因素,。請(qǐng)按照正確的培養(yǎng)方法來(lái)解凍,、傳代,，以此保證細(xì)胞具備良好的增殖能力,，方便您的后繼研究順利進(jìn)行

質(zhì)量控制： 本細(xì)胞經(jīng)過(guò)了檢測(cè),，不含有細(xì)菌、真菌,、病毒（HIV,、HBV、HCV）,、支原體,。 

培養(yǎng)條件：37℃，5% CO₂,，PH值7.2~7.4,，無(wú)菌恒溫培養(yǎng)。 

用途： 本產(chǎn)品只提供給進(jìn)一步的科研使用,，不可應(yīng)用于治療等其他方面,。

細(xì)胞相關(guān)操作（注意：細(xì)胞操作都需嚴(yán)格按照無(wú)菌操作）

收到復(fù)蘇好的貼壁細(xì)胞的處理方法：

• 先從外包裝盒拿出細(xì)胞瓶，在細(xì)胞瓶表面噴一層酒精,，并小心去掉封口膜,；

• 在顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，并確定是否染菌,，如有染菌,，請(qǐng)立即拍照，并將細(xì)胞丟掉,；

• 將培養(yǎng)瓶置于37°C,，5% CO₂的無(wú)菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-6小時(shí),；

• 倒掉多余的培養(yǎng)基，留正常體積的培養(yǎng)基,；

• 重新將培養(yǎng)瓶置于37°C，5% CO₂的無(wú)菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜

6. 第二天傳代,。

收到凍存細(xì)胞的處理方法：

1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基,；

1. 從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍（解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞）；

1. 在超凈臺(tái)中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,，1000rpm離心5min,；

4.棄上清，加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,，輕輕晃勻,；

5.置于37°C，5% CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒(méi)有透氣孔的話,，瓶蓋不要擰太緊),；

6.第二天，用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng),。

細(xì)胞傳代

1.當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到90%以上時(shí),，給細(xì)胞傳代；

2.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基,；

3.在超凈臺(tái)中,，棄培養(yǎng)基，加入2-5mlPBS清洗細(xì)胞后,，再加入1ml胰酶消化細(xì)胞,；

4.顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓，有細(xì)胞開(kāi)始脫離瓶壁時(shí),，加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

5.用移液器輕輕吹下瓶壁上剩余的細(xì)胞，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞吹散,；

6.將細(xì)胞移入離心管中,，1000rpm離心5min；

7.棄上清,，加入15-20ml的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T75培養(yǎng)瓶中或按適當(dāng)比例傳到T25瓶中（確保細(xì)胞貼壁后融合度在25-50%之間）,，細(xì)胞密度在1×10⁴ cells/cm² (2.5×10⁵ cells/T-25瓶），混勻細(xì)胞懸液,，確保均勻分布,；

8.將培養(yǎng)瓶置于37°C，5% CO₂的無(wú)菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

細(xì)胞凍存

1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基,；

2.消化細(xì)胞后給細(xì)胞計(jì)數(shù):

1)洗凈晾干血小板計(jì)數(shù)板和蓋玻片,，將蓋玻片*覆蓋計(jì)數(shù)區(qū)；

2)充分混勻細(xì)胞,，取少量(0.1-0.5ml)細(xì)胞懸液與等體積的染色液臺(tái)盼藍(lán)混合,，移液器吹吸混合均勻，用移液器取20ul混合液從蓋玻片兩端(與中間凹槽平行的兩端)分別打入細(xì)胞,，以細(xì)胞懸液剛好浸濕蓋玻片為佳,；

3)顯微鏡下，數(shù)四個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)的總細(xì)胞數(shù),，無(wú)活性細(xì)胞染成藍(lán)色,，活細(xì)胞不被染色；

4)細(xì)胞密度=細(xì)胞總數(shù)/4×10000×2,；

這里10000是不變的,，因?yàn)橛?jì)數(shù)的細(xì)胞是在體積為1mm×1mm×0.1mm即10^-4cm³計(jì)數(shù)池內(nèi)，1cm³=1ml,，將四個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)的細(xì)胞數(shù)除以4取平均數(shù),，乘2是補(bǔ)償加等體積臺(tái)盼藍(lán)形成的稀釋。

5)細(xì)胞活性=活細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%,。

注:細(xì)胞密度高時(shí),，可調(diào)整細(xì)胞懸液和臺(tái)盼藍(lán)的比例，計(jì)數(shù)時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可,。

3.當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到傳代密度且細(xì)胞活性在90%以上時(shí),，可以凍存細(xì)胞。

4.在超凈臺(tái)中將要凍存的細(xì)胞移入離心管,，1000rpm離心5min,。

5.棄上清，用90%培養(yǎng)液+10%DMSO的混合液重懸細(xì)胞,，并調(diào)整細(xì)胞密度為1-3×10⁶/ml,。

6.將細(xì)胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。

7.將裝有細(xì)胞的凍存管放入程序降溫凍存盒,，-20°C放1-2h后,，-80°C過(guò)夜，然后快速轉(zhuǎn)移到液氮中,。