Human IL-6ELISA Kit

檢測原理: 
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人IL-6抗體包被于酶標板上,，實驗時樣品或標準品中的
人IL-6會與包被抗體結(jié)合,，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-6抗體和辣根過氧化
物酶標記的親和素,。抗人IL-6抗體與結(jié)合在包被抗體上的人IL-6結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)
合而形成免疫復(fù)合物,，游離的成分被洗去,。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化
下呈現(xiàn)藍色,，加終止液后變成黃色,。用酶標儀在450nm波長處測OD值，IL-6濃度與OD450值之間
呈正比,，通過繪制標準曲線計算出樣品中IL-6的濃度,。 
Human IL-6ELISA Kit
樣品收集: 
1. 血清：全血樣品于室溫放置2小時或4℃后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測,，收集
血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原,，無內(nèi)毒素試管。 
2. 血漿：抗凝劑推薦使用EDTA-Na2,，樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘,，取上清即可
檢測。避免使用溶血,，高血脂樣品,。 
3. 組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會
影響測量結(jié)果）,，稱重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體
積比,，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,，并做好記錄,。
推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨,。為了進一步裂解組
織細胞,，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復(fù)凍融,。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,，
取上清檢測。 
4. 細胞培養(yǎng)上清：取細胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘,，除去雜質(zhì)及細胞碎片,。取上清檢測。 
5. 其它生物樣品：1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測 

6. 樣品應(yīng)清澈透明,，懸浮物應(yīng)離心去除。 
7. 樣品收集后若在1周內(nèi)進行檢測的可保存于4℃,，若不能及時檢測,，請按一次使用量分裝，凍
存于-20℃(1個月內(nèi)檢測),，或-80℃（6個月內(nèi)檢測）,，避免反復(fù)凍融。 
8. 如果您的樣品中檢測物濃度高于標準品zui高值,，請根據(jù)實際情況,，做適當倍數(shù)稀釋（建議先
做預(yù)實驗，以確定稀釋倍數(shù)）,。 
 Human IL-6ELISA Kit
試驗所需自備物品: 
1. 酶標儀(450nm波長濾光片) 
2. 高精度移液器,，EP管及一次性吸頭：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 
3. 37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水 
4. 吸水紙 
 
檢測前準備工作: 
1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒,，平衡至室溫,。 
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃,。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)
晶,，屬于正常現(xiàn)象,，可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液（加熱溫度不要超
過50℃,，使用時洗滌液應(yīng)為室溫）。當日使用,。 
3. 標準品: 于10000×g離心1分鐘,，加入標準品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標準品中,，旋緊管蓋，
靜置10分鐘,，上下顛倒數(shù)次,，待其充分溶解后，輕輕混勻（濃度為1000pg/mL）,。然后根據(jù)
需要進行倍比稀釋（注：不要直接在反應(yīng)孔中進行倍比稀釋）,。建議配制成以下濃度：1000、
500,、250、125,、62.5,、31.25、15.625,、0pg/mL,，標準品&樣品稀釋液直接作為空白孔0pg/mL。
如配制500pg/mL標準品：取0.5mL 1000pg/mL的上述標準品加入含有0.5mL標準品&樣品稀
釋液的EP管中,，混勻即可,，其余濃度依此類推。  
Human IL-6ELISA Kit
4. 生物素化抗體工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100μL/孔計）,，實際配制時應(yīng)多配
制100-200μL,。使用前15分鐘，以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1:100)成工作
濃度,。當日使用,。 
5. 酶結(jié)合物工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配制時應(yīng)多配制
100-200μL,。使用前15分鐘,，以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結(jié)合物(1:100)成工作濃度。
當日使用,。 
標準品稀釋方法圖例：（以500μL/管為例,，也可根據(jù)實際用量來稀釋，如200μL/管）