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小鼠α1-微球蛋白(α1M)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)-結(jié)果判定:定量測(cè)定
ELISA操作步驟復(fù)雜,,影響反應(yīng)因素較多,特別是固相載體的包被難達(dá)到各個(gè)體之間的一致,因此在定量測(cè)定中,每批測(cè)試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA,,標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬,曲線zui高點(diǎn)的吸光度可接近2.0,,繪制時(shí)常用半對(duì)數(shù)紙,,以檢測(cè)物的濃度為橫坐標(biāo),,以吸光度為縱坐標(biāo),將各濃度的值逐點(diǎn)連接,,所得曲線一般呈S形,,其頭、尾部曲線趨于平坦,,中央較呈直線的部分是的檢測(cè)區(qū)域,。甲胎蛋白質(zhì)ELISA測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線示。測(cè)定小分子量物質(zhì)常用競(jìng)爭(zhēng)法,,其標(biāo)準(zhǔn)曲線中吸光度與受檢物質(zhì)的濃度呈負(fù)相關(guān),。標(biāo)準(zhǔn)曲線的形狀因試劑盒所用模式的差別而略有不同。ELISA測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線示,。
小鼠α1-微球蛋白(α1M)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)之顯色
顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應(yīng),,此時(shí)酶催化無(wú)色的底物生成有色的產(chǎn)物。反應(yīng)的溫度和時(shí)間仍是影響顯色的因素,。在一定時(shí)間內(nèi),,陰性孔可保持無(wú)色,而陽(yáng)性孔則隨時(shí)間的延長(zhǎng)而呈色加強(qiáng),。適當(dāng)提高溫度有助于加速顯色進(jìn)行,。在定量測(cè)定中,加入底物后的反應(yīng)溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確,。定性測(cè)定的顯色可在室溫進(jìn)行,,時(shí)間一般不需要嚴(yán)格控制,有時(shí)可根據(jù)陽(yáng)性對(duì)照孔和陰性對(duì)照孔的顯色情況適當(dāng)縮短或延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間,,及時(shí)判斷,。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應(yīng)20-30分鐘后即不再加深,再延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間,,可使本底值增高。OPD底物液受光照會(huì)自行變色,,顯色反應(yīng)應(yīng)避光進(jìn)行,,顯色反應(yīng)結(jié)束時(shí)加入終止液終止反應(yīng)。OPD產(chǎn)物用硫酸終止后,,顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色,。
TMB受光照的影響不大,可在室溫中置于操作臺(tái)上,,邊反應(yīng)觀察結(jié)果,。但為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性,宜在規(guī)定的適當(dāng)時(shí)間閱讀結(jié)果,。TMB經(jīng)HRP作用后,,約40分鐘顯色達(dá),,隨即逐漸減弱,至2小時(shí)后即可*消退至無(wú)色,。TMB的終止液有多種,,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止。這類終止劑尚能使藍(lán)色維持較長(zhǎng)時(shí)間(12-24小時(shí))不褪,,是目視判斷的良好終止劑,。此外,各類酸性終止液則會(huì)使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色,,此時(shí)可用特定的波長(zhǎng)(450nm)測(cè)讀吸光值,。
小鼠α1-微球蛋白(α1M)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)之比色
比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,然后將板正確放入酶標(biāo)比色儀的比色架中,。以軟板為載體的試驗(yàn),,需先將板置于標(biāo)準(zhǔn)96孔的座架中,才可進(jìn)行比色,。在加底物液顯色前,,先將軟板邊緣剪凈,這樣,,此板就可*平妥坐入座架中,。比色時(shí)應(yīng)先以蒸餾水校零點(diǎn),測(cè)讀底物孔(未經(jīng)任何反應(yīng)僅加底物液的孔)和空白孔(以生理鹽水或稀釋液代替標(biāo)本作全過(guò)程的孔),,以記錄本次試驗(yàn)的試劑狀況,。其后可用空白孔以蒸餾水校零點(diǎn),以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度,,然后進(jìn)行計(jì)算,。
比色結(jié)果的表達(dá)以往通用光密度(oplical density,OD),,現(xiàn)按規(guī)定用吸光度(absorbence,,A),兩者含義相同,。通常的表示方法是,,將吸收波長(zhǎng)寫(xiě)于A字母的右下角,如OPD的吸收波長(zhǎng)為492nm,,表示方法為"A492nm"或"OD492nm",。
小鼠α1-微球蛋白(α1M)ELISA試劑盒相關(guān)產(chǎn)品如下:xyF754Hu 人過(guò)氧化還原酶4(PRDX4)檢測(cè)試劑盒
xyF756Hu 人過(guò)氧化還原酶6(PRDX6)檢測(cè)試劑盒
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xyG531Hu 人溶血卵磷脂?;D(zhuǎn)移酶3(LPCAT3)檢測(cè)試劑盒
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