膠體金免疫層讀卡儀功能應(yīng)用及原理

膠體金（colloidal gold）是氯金酸（HAuCl4）在還原劑如白磷,、抗壞血酸,、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下,，金離子還原后聚合成的一定大小的金顆粒,，它由一個基礎(chǔ)的晶核（11個金原子形成的二十面體）和包圍在外的雙離子層構(gòu)成（內(nèi)層為負(fù)離子層AuCl2-,外層是帶正電荷的H+）。由于靜電作用,，金顆粒之間相互排斥而懸浮成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài),，形成帶負(fù)電的疏水膠溶液，故稱膠體金,。

膠體金具有高電子密度,，能與多種生物大分子結(jié)合,，已成為繼熒光素、放射性同位素和酶之后,，在免疫標(biāo)記技術(shù)中較常用的一種非放射性示蹤劑,。膠體金的粒徑一般在1-100nm之間，能夠均勻,、穩(wěn)定地分散在液體中,，呈球形小顆粒或橢圓形大顆粒,。膠體金顆粒最外層可以吸附大量的正離子,，能夠均勻分散在溶液中。由于膠體金表面呈負(fù)電性,，能夠與表面帶正電荷的抗原、抗體通過靜電作用進行標(biāo)記,。

膠體金免疫層讀卡儀可以檢測血凝法,、酶聯(lián)免疫法、膠體金法制成的獸藥,、瘦肉精,、抗生素、動物疫病等快速檢測卡;金標(biāo)讀卡儀廣泛應(yīng)用于醫(yī)院學(xué)校,、養(yǎng)殖場,、屠宰場、肉產(chǎn)品深加工企業(yè),、檢驗檢疫等單位的食用,。傳統(tǒng)的金標(biāo)診斷試劑，主要通過目測觀察來判斷檢驗結(jié)果,，只能用于定性檢測,，而且受人為因素影響較大，檢測結(jié)果無法進行數(shù)據(jù)保存,，不便于追蹤溯源和歷史記錄的查詢,，膠體金免疫層讀卡儀可以讀取檢測卡量化的結(jié)果值，取代了傳統(tǒng)肉眼觀察結(jié)果的方式,，使得檢測結(jié)果更加的精準(zhǔn),，客觀，穩(wěn)定,。

膠體金法檢測原理

將特異性的抗體以條帶狀固定在膜上（T線）,，膠體金標(biāo)記試劑吸附在結(jié)合上（金墊），當(dāng)待檢抗原加到試紙條一端的樣本墊上后,，樣本通過毛細(xì)作用向前移動,，溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng),，再移動至固定的抗原或抗體的區(qū)域時，待檢物與金標(biāo)試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留,，聚集在檢測帶上,，可通過肉眼觀察到顯色結(jié)果。

膠體金技術(shù)優(yōu)勢與不足

優(yōu)勢

快速：所有反應(yīng)能在15分鐘內(nèi)完成,；

操作簡便：便于個人自測或醫(yī)院檢測,；

成本低：不需要特殊的儀器設(shè)備；

穩(wěn)定性好：試劑效期可達兩年或更長時間,；

缺點

較ELISA,、化學(xué)發(fā)光等方法靈敏度低；

易出現(xiàn)假陽性,、假陰性,；

存在HOOK效應(yīng)；

膠體金試劑條組成

膠體金試紙條主要由樣品墊,、金墊,、硝酸纖維素膜（NC膜）、吸水紙4個部分組成,，從上至下依次首尾互相銜接,，粘貼在PVC底板上。

作用

a. 樣品墊：檢測樣本滴加位置,，對檢測樣本具有一定的過濾和緩沖作用,，降低樣本中離子強度或酸堿度對檢測結(jié)果的干擾。

b. 金墊：將膠體金標(biāo)記抗體通過干燥固定在玻璃纖維素膜上,，是追蹤抗體與抗原的反應(yīng),。

c. 硝酸纖維素膜：膜上預(yù)先包被上檢測線和質(zhì)控線，能夠與膠體金標(biāo)記物發(fā)生免疫反應(yīng)相結(jié)合,，使膠體金在檢測線發(fā)生聚集,，根據(jù)檢測線的顯色狀況進行判讀結(jié)果。

d. 吸水墊：通過吸水作用使液體樣品向上流動,，帶動金墊的金標(biāo)抗體向上移動,，從而與檢測線的抗原發(fā)生反應(yīng)。

膠體金讀取儀