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月餅類糕點(diǎn)中黃曲霉毒素B1的檢測方法
黃曲霉毒素是一種肝臟毒素,，對人和許多動物都有*的致癌性,，其中黃曲霉毒素B1毒性zui大,，致癌性zui強(qiáng),。因此,，食品中黃曲霉毒素B1的檢測是非常重要的,。下面介紹的分離及測定黃曲霉毒素的方法——固相酶聯(lián)免疫法是常規(guī)分析中常用的一種重要方法。
一,、 原理
CSY-E96H黃曲霉毒素快速檢測儀 （黃曲霉素快速檢測儀|黃曲霉素檢測儀|黃曲霉毒素測試儀）采用固相酶聯(lián)免疫吸附ELISA的原理,即酶聯(lián)免疫法,；可定量檢測糧食、食品,、飼料,、油脂、乳制品,、藥物,、飲料、牛奶,、酒等產(chǎn)品中的黃曲霉毒素(B1,，B2，G1,，G2 M1 M2 AFM1,、AFP1,、AFQ1、AFB1-2,，3-環(huán)氧化物）含量,。
快速檢測實驗操作所需的試劑及材料：微孔板 包被有AFB1-BSA；5個濃度的AFB1標(biāo)準(zhǔn)溶液各(1mL)可直接使用,；標(biāo)準(zhǔn)1：0ng/mL 可直接使用,；標(biāo)準(zhǔn)
2：1.0ng/mL可直接使用；標(biāo)準(zhǔn)
3：2.0ng/mL 可直接使用,；標(biāo)準(zhǔn)
4：5.0ng/mL可直接使用；標(biāo)準(zhǔn)
5：10.0ng/mL 可直接使用,；AFS單克隆抗體溶液(6mL)可直接使用,；酶標(biāo)物(12mL)可直接使用；顯色液(12mL),；終止液(6mL),；濃縮洗液(30mL) ；空白對照(6ml)微孔板酶標(biāo)儀(含450nm)：定量分析用,；振蕩器,，粉碎機(jī)，微量移液器,，量筒,，漏斗和容量瓶，快速定性濾紙,；試劑：氯化鈉(分析純),、甲醇(分析純)、去離子水或蒸餾水
檢驗操作注意事項：標(biāo)準(zhǔn)溶液中含有黃曲霉毒素,，應(yīng)特別小心,。使用過的玻璃容器及黃曲霉毒素溶液用pH7的次氯酸溶液(10%v/v)浸泡。終止液為0.5N硫酸,，避免接觸皮膚,。不要交換使用不同批號盒中的試劑。
黃曲霉毒素B1檢驗實驗樣品前處理：樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存,，取5g粉碎的有代表性的樣品,，加1.25g氯化鈉及25mL70% 甲醇-水，強(qiáng)力振蕩3分鐘,；用快速定性濾紙過濾,；取1mL濾液，用1%氯化鈉溶液稀釋10倍,；取50μL稀釋液進(jìn)行分析,；據(jù)需要可以增加樣品量,，但甲醇溶液的量也應(yīng)相應(yīng)增加。
檢驗實驗注意事項和測定程序：每次加樣后立即將所有試劑放回2-8 ℃,，每步操作時間控制在5min內(nèi),， 孵育過程中應(yīng)避光。測定程序1. 取所需數(shù)量的板條插入微孔架,，記錄樣品及標(biāo)準(zhǔn)的位置,。
2. 加入50mL標(biāo)準(zhǔn)品或處理好的樣品到微孔，每個標(biāo)準(zhǔn)和樣品必須使用新的吸頭,。
3. 將50mL黃曲霉毒素B1單克隆抗體使用液加入到每個微孔(注意移液器管尖不要接觸到放進(jìn)孔中的液體,，避免交叉污染)，在適當(dāng)位置孔加空白對照液100mL,，37℃孵育90min,。4. 甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板3min×3次,，zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體,。
5. 每孔加入酶標(biāo)物100mL，37℃孵育60min,。
6. 甩掉孔中液體,，用洗液洗滌微孔板3min×3次，zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體,。
7. 每孔加入顯色液100mL(2滴),，37℃孵育10 min -12min
8. 每孔加入終止液50mL(1滴)，立即用酶標(biāo)儀在波長為450nm處測定吸光度值(OD值),。
