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水產(chǎn)品中氯霉素的測(cè)定 
 1.目的  使氯霉素的測(cè)定處于受控狀態(tài)，保證氯霉素檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性與一致性,；規(guī)范參加本項(xiàng)目檢測(cè)工作人員的操作規(guī)程。
  2.適用范圍  適用于水產(chǎn)品中氯霉素殘留量的篩選檢驗(yàn),。 
 3.引用標(biāo)準(zhǔn)  《動(dòng)物源食品中氯霉素殘留檢測(cè) 酶聯(lián)免疫吸附法》農(nóng)業(yè)部1025號(hào)公告-26-2008 《氯霉素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)》 深圳市芬析儀器制造有限公司 《無(wú)公害食品 水發(fā)水產(chǎn)品》 NY 5172-2002  《分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法》GB/T 6682-2008 《食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法 理化部分 總則》 GB/T5009.1-2003 
 4.概述  氯霉素屬?gòu)V譜抗生素,，曾在畜牧業(yè)中廣為應(yīng)用。但氯霉素有較強(qiáng)的副作用和毒性作用,，如果氯霉素在食用動(dòng)物中殘留,，可通過(guò)食物鏈傳給人類，長(zhǎng)期微量攝入氯霉素,，不僅使人體腸道正常菌群失調(diào),，而且還會(huì)引起多種疾病，對(duì)人類的健康造成危害,。世界上許多國(guó)家禁止此藥用于生產(chǎn)食品動(dòng)物,，并規(guī)定了在畜產(chǎn)品中氯霉素不得檢出。 
 5.測(cè)定 
 5.1.原理      
氯霉素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒,，主要是利用抗原與抗體的特異性免疫化學(xué)反應(yīng)的基本原理來(lái)進(jìn)行的,，換句話說(shuō)，就是利用酶標(biāo)記物與樣品中的氯霉素與微孔中的抗體進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng),。在整個(gè)反應(yīng)當(dāng)中,，如果樣品中的氯霉素殘留的越多，相對(duì)地就會(huì)競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)越多的酶標(biāo)記物,，使得能結(jié)合上抗體的酶標(biāo)記物相對(duì)地減少,，用TMB底物顯色，樣品中的氯霉素含量與樣品的吸光度值呈反比,，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出氯霉素含量,。 
 5.2.儀器 
 5.2.1.CSY-E96K抗生素殘留檢測(cè)儀(配備450nm濾光片)。（深圳市芬析儀器制造有限公司）
 5.2.2.旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,。
 5.2.3.勻漿器,。 
5.2.4.振蕩器。
 5.2.5.冷凍離心機(jī),。 
 5.2.6.微量移液器:單道20μL,、50μL、100μL,、1000μL,；多道250μL,。
 5.2.7.天平:感量0.01g。
 5.2.8.氮?dú)獯蹈裳b置,。   

水產(chǎn)品中氯霉素的測(cè)定 
  5.3.試劑和材料      以下所有試劑,，均為分析純?cè)噭凰疄榉螱B/T 6682規(guī)定的二級(jí)水,。
 5.3.1.乙酸乙酯,。
 5.3.2.乙腈。 
5.3.3.正己烷,。 
 5.3.4.0.5N鹽酸溶液
 5.3.5.0.5N氫氧化鈉溶液 
 5.3.6.氯霉素酶聯(lián)免疫試劑盒:2℃～8℃冰箱中保存,。  
5.4.樣本處理 
 a) 將3克已均質(zhì)的樣品放入15mL離心管中，再加入6mL乙酸乙酯,，震蕩5分鐘,。  
b) 用離心機(jī)離心1700×g10分鐘，取2mL上層液(乙酸乙酯)至10mL玻璃管中,，于50℃下,，利 用氮?dú)鈱⒂袡C(jī)溶劑吹干。  
c) 在此玻璃管中加入正己烷1mL,，先將殘余物*溶解后,，再加入1mL樣品稀釋液，震蕩30 秒鐘,。  
d) 用離心機(jī)離心1700×g 10分鐘,，利用吸管吸去包含中問(wèn)乳化層部分的上層液(正己烷)，再 吸取下層液(水層)備用,。 
稀釋倍數(shù):1  若待測(cè)物為白蝦可按以下流程將樣品做8倍濃縮以增加檢品敏感度  
a) 將6克已均質(zhì)的樣品放入15mL離心管中,，再加入6mL乙酸乙酯，震蕩5分鐘,。 
b) 用離心機(jī)離心1700×g 10分鐘,，取4mL上層液(乙酸乙酯)至10mL玻璃管中,，于50℃下,，利 用氮?dú)鈱⒂袡C(jī)溶劑吹干。  
c) 在此玻璃管中加入正己烷2mL,，先將殘余物*溶解后,，再加入0.5mL樣品稀釋液，震蕩30 秒鐘,。  
d) 用離心機(jī)離心1700×g 10分鐘,，利用吸管吸去包含中問(wèn)乳化層部分的上層液(正己烷)，再 吸取下層液(水層)備用,。 稀釋倍數(shù):0.125  
5.5.酶聯(lián)免疫測(cè)定  
5.5.1.將標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)后分別分別加入100μL氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液,。 
5.5.2.在其他的微孔加入100μL已完成前處理的樣品溶液,。
 5.5.3.再于每一微孔另加入50μL已*回溫的酶標(biāo)記物。 
 5.5.4.輕敲酶標(biāo)板四周,，使其充分混合后于室溫下避光靜置1小時(shí),。  
5.5.5.將微孔中的反應(yīng)液甩掉，再將已稀釋清洗液加滿每一微孔后甩掉,，重復(fù)3次,。
 5.5.6.zui后一次甩掉清洗液后，在吸水紙上拍干,。  
5.5.7.于每一微孔加入顯色液100μL后,，輕敲酶標(biāo)板四周，使其充分混合,。
 5.5.8.于室溫下避光靜置20分鐘,。  
5.5.9.加入反應(yīng)終止液，每一微孔加入100μL,。  
5.5.10.酶標(biāo)儀以單波長(zhǎng)450nm或雙波長(zhǎng)450nm/650nm讀值,。    

水產(chǎn)品中氯霉素的測(cè)定   
5.6.結(jié)果判定  
5.6.1.定性判定      
用樣品的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出樣本所含氯霉素濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣品1的吸光度值為0.313,，樣品2的吸光度值為1.032,，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb為1.892；0.025ppb為1.501,；0.05ppb為1.175,；0.1ppb為0.751；0.3ppb為0.421,；0.6ppb為0.198,。則樣品1的濃度范圍0.3ppb-0.6ppb;樣品2的濃度范圍0.05ppb-0.lppb。(再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)) 
5.6.2.定量判定  所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(BO)再乘以100%,，即百分吸光度值,。  百分吸光度值 % =B B0×100%  B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值。 BO—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值,。  以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),，以氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯霉素的實(shí)際濃度,。  若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,，更便于大量樣品的準(zhǔn)確、快速分析,。  
6.檢測(cè)方法靈敏度,、準(zhǔn)確度,、精密度  
6.1.靈敏度      本方法在魚(yú)、蝦,、蟹樣品中氯霉素的檢出限為0.025ppb,。  
6.2.準(zhǔn)確度  本方法的回收率為70％～130％。  
6.3.精密度      本方法樣本的變異系數(shù)小于10％,。  
7.相關(guān)文件  氯霉素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)（深圳市芬析儀器制造有限公司） 酶標(biāo)儀操作規(guī)程 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀操作規(guī)程 勻漿器操作規(guī)程 振蕩器操作規(guī)程 冷凍離心機(jī)操作規(guī)程 氮吹儀操作規(guī)程 天平稱量操作規(guī)程,。    
   
8.注意事項(xiàng)  
1) 使用前請(qǐng)先將試劑盒回溫至室溫(置于室溫60分鐘以上)，各溶液皆搖勻后方可使用,。  
2) 回溫后,，取出所需酶標(biāo)板條，將剩余未測(cè)的ELISA孔條立即放回鋁箔袋中,，置于4℃保存,。
 3) 10倍樣品稀釋液與10倍清洗液請(qǐng)用蒸餾水稀釋10倍方可使用。(如1mL濃縮稀釋液加9mL 蒸餾水)稀釋后的1×萃取稀釋液和1×清洗液可于4℃保存一周,。 
4) 萃取流程請(qǐng)使用P.P.材質(zhì)的15mL離心管以免腐蝕,。 
5) 反應(yīng)終止液含0.5 N HCl，請(qǐng)小心操作,。 
6) 氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液含氯霉索,，請(qǐng)小心操作。  
7) 本試劑盒的所有試劑出廠前均做過(guò)完整的測(cè)試,，請(qǐng)使用試劑盒提供的藥品及試劑,，勿任意更 換。 
 8) ELISA所得的氯霉索濃度若低于該樣品檢品敏感度即可視為該樣品背景值,，無(wú)須回乘稀釋倍 數(shù),。
反之若所得的氯霉索濃度若高于該樣品檢品敏感度，即可能為氯霉索陽(yáng)性樣品,，建議使用其它檢測(cè)方法檢測(cè),，如GC/MS等。

水產(chǎn)品中氯霉素殘留測(cè)定儀儀器簡(jiǎn)介：

CSY-E96S水產(chǎn)品中氯霉素殘留測(cè)定儀采用固相酶聯(lián)免疫吸附ELISA的原理,即酶聯(lián)免疫法,；水產(chǎn)品藥物殘留檢測(cè)儀可定量快速檢測(cè)阿莫西林,、孔雀石綠、磺胺類(總量),、重金屬,、恩諾沙星,、環(huán)丙沙星,、 紅霉素、氯霉素,、土霉素,、四環(huán)素,、 磺胺類(總量)、喹乙醇,、已烯雌酚等有毒有害物質(zhì)及抗生素殘留檢測(cè),。并且可以連接食品安全監(jiān)控系統(tǒng)。

水產(chǎn)品中氯霉素殘留測(cè)定儀技術(shù)參數(shù)：

☆波長(zhǎng)范圍:300nm-1000nm

☆波長(zhǎng)準(zhǔn)確度:±2nm

☆吸光度范圍: 0.000~4.000ABS

☆分辨率 :0.001Abs

☆穩(wěn)定性 : ±0.001A/hr

☆透射比重復(fù)性: ≤0.5%T

☆光源 : 進(jìn)口LED

☆樣品池 : 微孔板