凱氏定氮儀原理：
蛋白質(zhì)是含氮的有機化合物,。食品與硫酸和催化劑一同加熱消化,，使蛋白質(zhì)分解，分解的氨與硫酸結(jié)合生成硫酸銨,。然后堿化蒸餾使氨游離,，用硼酸吸收后再以硫酸或鹽酸標準溶液滴定，根據(jù)酸的消耗量乘以換算系數(shù),，即為蛋白質(zhì)含量,。
1.有機物中的胺根在強熱和CuSO4，濃H2SO4 作用下,，硝化生成(NH4)2SO4
反應式為：2NH2+H2S04+2H＝(NH4)2S04 (其中CuSO4做催化劑)
2.在凱氏定氮器中與堿作用,，通過蒸餾釋放出NH3 ，收集于H3BO3 溶液中
反應式為: (NH4)2SO4+2NaOH＝2NH3+2H2O+Na2SO4 2NH3+4H3BO3＝(NH4)2B4O7+5H2O
3.用已知濃度的H2SO4(或HCI)標準溶液滴定,，根據(jù)HCI消耗的量計算出氮的含量,，然后乘以相應的換算因子，既得蛋白質(zhì)的含量
反應式為：
(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O＝(NH4)2SO4+4H3BO3
(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O＝2NH4Cl+4H3BO3
凱氏定氮儀操作步驟：
(一)消化
1,、準備6個凱氏燒瓶,，標號,。1、2,、3號燒瓶中分別加入適當濃度的蛋白溶液1.0mL,，樣品要加到燒瓶底部，切勿沾在瓶口及瓶頸上,。再依次加入硫酸鉀-硫酸銅接觸劑0.3g,，濃硫酸2.0mL，30%過氧化氫1.0mL,。4,、5、6號燒瓶作為空白對照,，用以測定試劑中可能含有的微量含氮物質(zhì),，對樣品測定進行校正。4,、5,、6號燒瓶中加入蒸餾水1.0mL代替樣液，其余所加試劑與1,、2,、3號燒瓶相同。
2,、將加好試劑的各燒瓶放置消化架上,，接好抽氣裝置。先用微火加熱煮沸,，此時燒瓶內(nèi)物質(zhì)炭化變黑,，并產(chǎn)生大量泡沫，務必注意防止氣泡沖出管口,。待泡沫消失停止產(chǎn)生后,，加大火力，保持瓶內(nèi)液體微沸,，至溶液澄清后,，再繼續(xù)加熱使消化液微沸15min。在消化過程中要隨時轉(zhuǎn)動燒瓶,，以使內(nèi)壁粘著物質(zhì)均能流入底部,，以保證樣品*消化。消化時放出的氣體內(nèi)含SO2,，具有強烈刺激性，因此自始自終應打開抽水泵將氣體抽入自來水排出,。整個消化過程均應在通風櫥中進行,。消化*后,，關(guān)閉火焰，使燒瓶冷卻至室溫,。
(二)蒸餾和吸收
蒸餾和吸收是在微量凱氏定氮儀內(nèi)進行的,。凱氏定氮蒸餾裝置種類甚多，大體上都由蒸氣發(fā)生,、氨的蒸餾和氨的吸收三部分組成,。
儀器安裝前，各部件需經(jīng)一般方法洗滌干凈,，所用橡皮管,、塞須浸在10%NaOH溶液中，煮約10min,，水洗,、水煮10min，再水洗數(shù)次,，然后安裝并固定在一只鐵架臺上,。
儀器使用前，微量全部管道都須經(jīng)水蒸氣洗滌,，以除去管道內(nèi)可能殘留的氨,，正在使用的儀器，每次測樣前,，蒸氣洗滌5min即可,。較長時間未使用的儀器，重復蒸氣洗滌,，不得少于三次,，并檢查儀器是否正常。仔細檢查各個連接處,，保證不漏氣,。
首先在蒸氣發(fā)生器中加約2/3體積蒸餾水，加入數(shù)滴硫酸使其保持酸性,，以避免水中的氨被蒸出而影響結(jié)果,，并放入少許沸石(或毛細管等)，以防爆沸,。沿小玻杯壁加入蒸餾水約20mL讓水經(jīng)插管流入反應室,，但玻杯內(nèi)的水不要放光，塞上棒狀玻塞,，保持水封,，防止漏氣。蒸氣發(fā)生后,，立即關(guān)閉廢液排放管上的開關(guān),，使蒸氣只能進入反應室,，導致反應室內(nèi)的水迅速沸騰，蒸出蒸氣由反應室上端口通過定氮球進入冷凝管冷卻,，在冷凝管下端放置一個錐形瓶接收冷凝水,。從定氮球發(fā)燙開始計時，連續(xù)蒸煮5min,，然后移開煤氣燈,。沖洗完畢，夾緊蒸氣發(fā)生器與收集器之間的連接橡膠管,，由于氣體冷卻壓力降低,，反應室內(nèi)廢液自動抽到反應室外殼中，打開廢液排出口夾子放出廢液,。如此清洗2～3次,，再在冷凝管下?lián)Q放一個盛有硼酸-指示劑混合液的錐形瓶使冷凝管下口*浸沒在溶液中，蒸餾1～2min,，觀察錐形瓶內(nèi)的溶液是否變色,。如不變色，表示蒸餾裝置內(nèi)部已洗干凈,。移去錐形瓶,，再蒸餾1～2min，用蒸餾水沖洗冷凝器下口,，關(guān)閉煤氣燈,，儀器即可供測樣品使用。
由于定氮操作繁瑣,，為了熟悉蒸餾和滴定的操作技術(shù),，初學者宜先用無機氮標準樣品進行反復練習，再進行有機氮未知樣品的測量
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