固相萃取儀的使用及維護(hù)
閱讀:1903 發(fā)布時(shí)間:2018-10-11
1 原理 固相萃取技術(shù) 在過(guò)去的二十多年中,,固相萃取作為化學(xué)分離和純化的一個(gè)強(qiáng)有力工具出現(xiàn)了。從痕量樣品的前處理到工業(yè)規(guī)模的化學(xué)分離,,吸附劑萃取在制藥、精細(xì)化工、生物醫(yī)學(xué),、食品分析、有機(jī)合成,、環(huán)境和其他領(lǐng)域起著越來(lái)越重要的作用,。 固相萃取是一個(gè)包括液相和固相的物理萃取過(guò)程,。在固相萃取中,,固相對(duì)分離物的吸附力比溶解分離物的溶劑更大。當(dāng)樣品溶液通過(guò)吸附劑床時(shí),,分離物濃縮在其表面,,其他樣品成分通過(guò)吸附劑床;通過(guò)只吸附分離物而不吸附其他樣品成分的吸附劑,,可以得到高純度和濃縮的分離物,。 保留和洗脫 在固相萃取中通常的方法是將固體吸附劑裝在一個(gè)針筒狀柱子里,使樣品溶液通過(guò)吸附劑床,,樣品中的化合物或通過(guò)吸附劑或保留在吸附劑上(依靠吸附劑對(duì)溶劑的相對(duì)吸附),。“保留"是一種存在于吸附劑和分離物分子間吸引的現(xiàn)象,,造成當(dāng)樣品溶液通過(guò)吸附劑床時(shí),,分離物在吸附劑上不移動(dòng)。保留是三個(gè)因素的作用:分離物,、溶劑和吸附劑,。所以,一個(gè)給定的分離物的保留行為在不同溶劑和吸附劑存在下是變化的,?!跋疵?是一種保留在吸附劑上的分離物從吸附劑上去除的過(guò)程,這通過(guò)加入一種對(duì)分離物的吸引比吸附劑更好的溶劑來(lái)完成,?! ∪萘亢瓦x擇性 吸附劑的容量是在合適條件下,單位吸附劑的量能夠保留一個(gè)強(qiáng)保留分離物的總量,。不同鍵合硅膠吸附劑的容量變化范圍很大,。選擇性是吸附劑區(qū)別分離物和其他樣品基質(zhì)化合物的能力,也就是說(shuō),,保留分離物去除其他樣品化合物,。一個(gè)高選擇性吸附劑是從樣品基質(zhì)中僅保留分離物的吸附劑。吸附劑選擇性是三個(gè)參數(shù)的作用:分離物的化學(xué)結(jié)構(gòu),、吸附劑的性質(zhì)和樣品基質(zhì)的組成,。2 分類 1.正相固相萃取所用的吸附劑都是極性的.取決于目標(biāo)化合物的極性官能團(tuán)與吸附劑表面的極性官能團(tuán)之間相互作用,其中包括了氫鍵,,π—π鍵相互作用,,偶極-偶極相互作用和偶極-誘導(dǎo)偶極相互作用以及其他的極性-極性作用?! ?.反相固相萃取所用的吸附劑和目標(biāo)化合物通常是非極性的或極性較弱的,,主要是靠非極性-非極性相互作用,是范德華力或色散力,?! ?.離子交換固相萃取是靠目標(biāo)化合物與吸附劑之間的相互作用是靜電吸引力 。3 簡(jiǎn)要過(guò)程 1.一個(gè)樣品包括分離物和干擾物通過(guò)吸附劑,; 2.吸附劑選擇性的保留分離物和一些干擾物,,其他干擾物通過(guò)吸附劑; 3.用適當(dāng)?shù)娜軇┝芟次絼?,使先前保留的干擾物選擇性的淋洗掉,,分離物保留在吸附劑床上,; 4.純化、濃縮的分離物從吸附劑上淋洗下來(lái),。4 固相萃取技術(shù) 1.選擇SPE 小柱或?yàn)V膜首先應(yīng)根據(jù)待測(cè)物的理化性質(zhì)和樣品基質(zhì), 選擇對(duì)待測(cè)物有較強(qiáng)保留能力的固定相,。若待測(cè)物帶負(fù)電荷, 可用陰離子交換填料, 反之則用陽(yáng)離子交換填料。若為中性待測(cè)物, 可用反相填料萃取,。SPE 小柱或?yàn)V膜的大小與規(guī)格應(yīng)視樣品中待測(cè)物的濃度大小而定,。對(duì)于濃度較低的體內(nèi)樣品, 一般應(yīng)選用盡量少的固定相填料萃取較大體積的樣品,?! ?.活化萃取前先用充滿小柱的溶劑沖洗小柱或用5~ 10ml 溶劑沖洗濾膜。一般可先用甲醇等水 溶性有機(jī)溶劑沖洗填料, 因?yàn)榧状寄軡?rùn)濕吸附劑表面, 并滲透到非極性的硅膠鍵合相中, 使硅膠更容易 被水潤(rùn)濕, 之后再加入水或緩沖液沖洗,。加樣前, 應(yīng)使SPE 填料保持濕潤(rùn), 如果填料干燥會(huì)降低樣品?! ×糁? 而各小柱的干燥程度不一, 則會(huì)影響回收率的重現(xiàn)性?! ?.加樣一般可采取以下措施: (1) 用0.1mol/L 酸或堿調(diào)節(jié), 使pH<3或pH>9, 離心取上層液萃?。?2) 用甲醇,、乙腈等沉淀蛋白質(zhì)后取上清液, 以水或緩沖液稀釋后萃?。?3) 用酸或無(wú)機(jī)鹽沉淀蛋白質(zhì)后取上清液, 調(diào)節(jié)pH 值后萃??;(4) 超聲15min后加入水、緩沖液, 取上清液萃取,。尿液樣品中的藥物濃度較高, 加樣前先用水或緩沖液稀釋, 必要時(shí)可用酸,、堿水解反應(yīng)破壞藥物與蛋白質(zhì)的結(jié)合, 然后萃取。流速應(yīng)控制為2~4ml/min, 流速快不利于待測(cè)物與固定相結(jié)合,?! ?.清洗填料反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液, 可在清洗液中加入少量有機(jī)溶劑、無(wú)機(jī)鹽或調(diào)節(jié)pH值,。加入小柱的清洗液應(yīng)不超過(guò)一個(gè)小柱的容積, 而SPE濾膜為5~10ml,。 5.洗脫待測(cè)物應(yīng)選用5~10ml離子強(qiáng)度較弱但能洗下待測(cè)物的洗脫溶劑,。若需較高靈敏度, 則可先將洗脫液揮干后, 再用流動(dòng)相重組殘留物后進(jìn)樣,。體內(nèi)樣品洗脫后多含有水, 可選用冷凍干燥法。保留能力較弱的SPE 填料可用小體積,、較弱的洗脫液洗下待測(cè)物,再用極性較強(qiáng)的HPLC 分析柱如C18柱分析洗脫物,。若待測(cè)物可電離, 可調(diào)節(jié)pH 值, 抑制樣品離子化, 以增強(qiáng)待測(cè)物在反相SPE 填料中的保留, 洗脫時(shí)調(diào)節(jié)pH值使其離子化并用較弱的溶劑洗脫, 收集洗脫液后再調(diào)節(jié)pH值使其在HPLC分析中達(dá)到要求分離效果。在洗脫過(guò)程中應(yīng)減慢流速,用兩次小體積洗脫代替一次大體積洗脫, 回收率.