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水產(chǎn)品中孔雀石綠殘留快速檢測技術(shù)的現(xiàn)狀與突破
閱讀：1186發(fā)布時間：2021-3-1
水產(chǎn)品在我國動物產(chǎn)品消費中始終占據(jù)重要地位,，且消費份額較大——人均水產(chǎn)品消費約占豬牛羊肉消費量的一半,。隨著國民生活水平的提升,，人們對水產(chǎn)品的需求量也在逐年增加，這促使水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)快速發(fā)展,，但同時也引發(fā)了不少食品質(zhì)量安全問題,。目前，國內(nèi)市場主要以鮮活水產(chǎn)品為主,，養(yǎng)殖戶為有效預(yù)防魚類等患病和增加產(chǎn)量,，通常會非法使用禁用藥物，加之操作不規(guī)范,，往往導(dǎo)致水產(chǎn)品質(zhì)量不合格,，如消費者食用了藥物超標的水產(chǎn)品，嚴重的會危及生命。水產(chǎn)質(zhì)量安全問題日益突出,，引起了政府和消費者的廣泛關(guān)注,，建立有效解決水產(chǎn)中禁用藥物的快速檢測機制已迫在眉睫。水產(chǎn)品的質(zhì)量安全是人民享有健康生活的重要保障,，而水產(chǎn)品中違禁藥物殘留是當前危害嚴重的因素之一,，孔雀石綠就是其中具有代表性的一種違禁藥物。
2014年9月,，深圳特區(qū)布吉海鮮市場開展了一次名為“清水行動”的水產(chǎn)品專項執(zhí)法監(jiān)督抽查,。此次行動中，執(zhí)法部門共抽檢了43家水產(chǎn)品經(jīng)營戶,，共抽取樣品121份,，其中淡水魚樣品90份。經(jīng)檢測,，發(fā)現(xiàn)7個水產(chǎn)品樣品不合格(孔雀石綠超標5個,，硝基呋喃代謝物超標2個);2016年底，被國內(nèi)媒體“熱搜”的北京超市“活魚下架事件”引起大眾關(guān)注,社會普遍認為其與孔雀石綠的濫用有關(guān);2019年4月,，山東省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳委托山東省水產(chǎn)品質(zhì)量檢驗中心對臨朐縣水產(chǎn)品進行質(zhì)量安全抽檢,，被抽檢的6個鱘魚樣品檢驗呈陽性，結(jié)果為孔雀石綠含量超標;同年6月,，杭州市消保委對市屬7家買菜類APP進行消費評測,，結(jié)果為杭州美團、叮咚買菜的鱖魚,，天津永輝超市的草魚均被檢出孔雀石綠超標,。由此可見，孔雀石綠殘留問題已成為一項日益突出的食品安全問題,。
1 什么是孔雀石綠?
孔雀石綠作為染色劑常被用于皮革業(yè)、紡織業(yè),、制陶業(yè),、食品和生物等領(lǐng)域，是人工合成的三苯甲烷類化學(xué)物,。同時,，孔雀石綠也可以作為殺菌劑、驅(qū)蟲劑,，用于預(yù)防與治療水生動物的細菌,、真菌和寄生蟲感染，由于其成本低廉且*,，因此被普遍用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè),。然而隨著研究的深入，孔雀石綠高毒性、高殘留的性質(zhì)及潛在的致畸,、致癌,、致突變等毒副作用備受研究人員和消費者關(guān)注。鑒于孔雀石綠潛在的致癌性,，美國,、加拿大、日本,、歐盟等國家將其列為水產(chǎn)養(yǎng)殖禁用藥物,。歐盟法案2002/675/EC規(guī)定，動物源性食品中MG(孔雀石綠)和LMG(無色孔雀石綠)殘留*為2μg/kg;日本肯定列表明確規(guī)定,，在進口水產(chǎn)品中不得檢出MG殘留,。我國于2002年5月將孔雀石綠列入《食品動物禁用的獸藥及其他化合物清單》，并于2005年制定了孔雀石綠的使用標準,，規(guī)定水產(chǎn)品中的MG和LMG的殘留總*不得超過1μg/kg,。盡管如此，違規(guī)使用孔雀石綠的事件仍然時有發(fā)生——歐盟,、日本,、中國香港等國家和地區(qū)均曾從由我國大陸進口的鰻魚中檢測出MG和LMG殘留，這不僅影響生態(tài)環(huán)境,，還會成為制約我國大陸地區(qū)食品質(zhì)量安全和市場競爭力的重要因素,。
2 檢測技術(shù)的應(yīng)用
孔雀石綠進入動物體內(nèi)后會快速代謝為無色孔雀石綠，而無色孔雀石綠為脂溶性物質(zhì),，相較孔雀石綠而言毒性更強,，且基本無法代謝。國內(nèi)外均以孔雀石綠及其代謝物無色孔雀石綠的總量為測定指標,，目前測定方法主要有儀器分析測定法(高效液相法,、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法等)、免疫學(xué)檢測技術(shù)(酶聯(lián)免疫檢測技術(shù),、膠體金檢測技術(shù)等),，以及微光探測與免疫學(xué)技術(shù)的結(jié)合方法(熒光定量檢測技術(shù))等。對于快速篩查市場而言,，后兩種方法已逐漸成為檢測應(yīng)用的主流手段,。
2.1 儀器分析法
儀器分析法主要是指利用氣相色譜法、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法,、液相色譜法,、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法或各類光譜儀等大型精密儀器來進行藥物殘留的分析方法。這是一種準確性高,、靈敏度高,、特異性好、選擇性強的檢測方法，現(xiàn)普遍用于檢測獸藥和農(nóng)藥殘留,，許多國家和地區(qū)已將高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法作為檢測水產(chǎn)品中孔雀石綠殘留的確證方法,。但是，此方法不僅需要使用昂貴的檢測儀器,，還需專業(yè)技術(shù)人員進行操作,，無法實現(xiàn)大批量快速檢測。同時,，該方法成本相對較高,，且不具備現(xiàn)場快速篩查的相關(guān)條件。
2.2 免疫學(xué)檢測技術(shù)
免疫學(xué)檢測技術(shù)利用抗原與抗體的特異性結(jié)合原理,，相較于儀器分析法而言,，其大的優(yōu)勢為操作便捷，有利于實現(xiàn)市場的快速篩查?，F(xiàn)階段,，用于食品安全的免疫學(xué)檢測技術(shù)主要有酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)和膠體金檢測技術(shù)。
2.2.1 酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)
該技術(shù)的原理是應(yīng)用抗原和抗體的特異結(jié)合與酶催化作用的有機結(jié)合,，利用酶促反應(yīng)原理放大了免疫檢測的效果,，在具有較高靈敏度的同時還具備了定量檢測的特性。這一檢測技術(shù)的優(yōu)點是檢測靈敏度高,、特異性好,、高通量和高精密度，且無需大型儀器設(shè)備就可進行大批量的樣品初篩檢測,。該法雖然較儀器法具有一定優(yōu)勢,，但由于其檢測時需專業(yè)人員操作，且檢測時間較長,，亦無法滿足現(xiàn)場快速篩查的需求,。
2.2.2 膠體金檢測技術(shù)
膠體金檢測技術(shù)是以納米金顆粒作為示蹤標識物，利用抗原和抗體具有特異性結(jié)合的原理所建立的新型免疫標記技術(shù),，是色譜層析技術(shù)和納米金技術(shù)的有機結(jié)合,。該技術(shù)的優(yōu)點是操作簡單、檢測時間短且無需專業(yè)技術(shù)人員操作,，因此膠體金技術(shù)被廣泛應(yīng)用于大分子類蛋白、農(nóng)藥殘留,、獸藥殘留,、小分子類藥物和毒素類等的快速檢測中。雖然膠體金法具有一定的優(yōu)勢,，但由于其靈敏度較差,，有漏檢風(fēng)險，仍無法滿足國家檢測標準的要求。
2.3 微光探測與免疫學(xué)技術(shù)的結(jié)合
隨著各類學(xué)科的交叉發(fā)展,，現(xiàn)代化快速檢測技術(shù)越來越趨向于便攜快速,、操作簡單、檢測結(jié)果即時準確的方向發(fā)展,，這也使開發(fā)出的相應(yīng)產(chǎn)品具有JIDA的市場潛力,，而熒光定量檢測技術(shù)就是食品安全快速檢測市場中具有代表性的新型檢測方法之一。此方法是對免疫學(xué)技術(shù),、色譜層析技術(shù),、生物探針技術(shù)和微光探測技術(shù)的有機結(jié)合，且兼具儀器分析法,、酶聯(lián)免疫檢測技術(shù),、膠體金檢測技術(shù)的優(yōu)點，取長補短,，在保持儀器分析法高JINGZHUN性的同時還保留了膠體金法檢測的快速,、簡便和酶免技術(shù)的高靈敏度、可定量的特點,。
3 孔雀石綠檢測技術(shù)的發(fā)展
孔雀石綠的殘留主要體現(xiàn)在水產(chǎn)品中,，且在高油酯魚類中尤為明顯，所以針對孔雀石綠的檢測對象主要為可食用組織,，根據(jù)該情況我國也建立了孔雀石綠在可食用性組織中的國家檢測標準,，但由于其需要昂貴的儀器和復(fù)雜的樣本處理過程，故難以在現(xiàn)場快速篩查場景和基層執(zhí)法部門中大量推廣,。在快速檢測產(chǎn)品中,，孔雀石綠酶免試劑盒早進入快速篩查市場，但由于其繁瑣的操作過程,，很快被膠體金產(chǎn)品所取代,。孔雀石綠膠體金產(chǎn)品雖然檢測速度快(只需30~45分鐘),，但其靈敏度較差,，增加了漏檢風(fēng)險。同時,，組織類樣本的前處理過程依然復(fù)雜費時(需要離心,、吹干等步驟)，不僅增加了人力成本,，也會在吹干大量溶劑時污染環(huán)境,。針對以上問題，食品檢測市場一直在尋求解決方法,，近年來推出的SPE產(chǎn)品就是對吹干步驟的優(yōu)化處理,。SPE方法雖然省略了吹干環(huán)節(jié),，使處理速度有了一定的提升，但同樣存在著一些不足：首先,，步驟和儀器未得到省略,，仍需使用離心及相應(yīng)的儀器，吹干步驟換成了過SPE柱,，同時也增加了固相萃取儀;其次,，SPE柱成本較高，約增加20%~40%的成本;第三,，吸附和洗脫時均需大量試劑,，這就在無形之中浪費了溶劑;第四，洗脫效率不穩(wěn)定,。
針對當前快速檢測方法存在的問題,，廣東達元綠洲食品安全科技股份有限公司(以下簡稱“食安科技”)經(jīng)過長時間的技術(shù)攻關(guān)，結(jié)合高分子納米材料和免疫層析卡的優(yōu)點,，開發(fā)了全新的孔雀石綠殘留快速檢測卡,，并結(jié)合先進的zhuanli數(shù)據(jù)采集技術(shù)，研制出了創(chuàng)新的孔雀石綠FST快速前處理方案(包含膠體金和熒光層析系列產(chǎn)品),，較傳統(tǒng)檢測產(chǎn)品而言,，其檢測效率提高2倍以上，靈敏度更優(yōu),，精密性更好,，智能化更高。
4 FST快速前處理方案
FST的技術(shù)理念基于組織類樣本快速便捷的前處理方案,，是食安科技專門為解決繁瑣的組織類樣本前處理問題而開發(fā)的國內(nèi)外SHOU 造方案,，可謂組織類樣本POCT技術(shù)的一大突破。其省略了離心,、吹干或上萃取柱步驟,，實驗全程只需一把移液器即可完成操作，大大縮短了樣本檢測時間,，降低了檢測難度,。
目前，食安科技的FST系列產(chǎn)品包括兩大類——FST-膠體金類和FST-熒光層析類,?？兹甘GFST-膠體金產(chǎn)品在保持同類市場高靈敏度檢測的前提下，把組織類的樣本處理進行了極簡化處理,，處理時間從常規(guī)的25~40分鐘縮短為10分鐘以內(nèi),，整個檢測過程無需任何輔助儀器，節(jié)省了人力及物力成本,，并順利通過了2018年的農(nóng)業(yè)部驗證和2019年的廣東省快檢驗證,。
雖然孔雀石綠FST-膠體金產(chǎn)品在性能上有了較大提升，但其不能定量的缺點始終無法解決,。針對這一難點,，食安科技開發(fā)了FST-熒光層析系列產(chǎn)品，其結(jié)合高分子納米技術(shù)和微光探測技術(shù),，實為FST-膠體金產(chǎn)品性能的進一步提升,，具有靈敏度高(可達液相質(zhì)譜的靈敏度要求)、樣本處理快速(縮短為5分鐘以內(nèi)),、抗干擾能力更強(較大稀釋比例降低了樣本對產(chǎn)品的干擾),、半定量的檢測(檢測結(jié)果以數(shù)據(jù)顯示)、數(shù)據(jù)即時處理(數(shù)據(jù)即時存儲或打印)等優(yōu)勢,?？兹甘GFST-熒光層析產(chǎn)品順利通過了2018年農(nóng)業(yè)部驗證，成為全場檢測時間短,、靈敏度高的快速檢測產(chǎn)品之一,。為了更好的區(qū)分現(xiàn)有市場中主流檢測產(chǎn)品間的差異，本文針對參加2018年農(nóng)業(yè)部驗證的相關(guān)技術(shù)產(chǎn)品做了簡單的比較,，如表1,。
5 結(jié)論與展望
水產(chǎn)品是國民餐桌食物的重要組成部分，我國政府也一直致力于解決食品安全問題,，近年來更是針對水產(chǎn)品藥物殘留加大了抽檢力度,。孔雀石綠一直是人們關(guān)注的重點,，但由于現(xiàn)有檢測技術(shù)的樣本前處理過程較為繁瑣,，抽檢率無法大幅提升。因此,，隨著政府的管控進一步加強,，快速篩查市場對現(xiàn)有的檢測技術(shù)也必將提出更高要求?？焖?、便捷、準確,、智能化等一直是快速檢測的重要需求,，而食安科技的FST前處理技術(shù)恰巧是對這一需求的良好補充。隨著FST技術(shù)的進一步發(fā)展,，相信其將對孔雀石綠濫用情況的監(jiān)管工作產(chǎn)生積極影響,。
廣東達元綠洲食品安全科技股份有限公司主營產(chǎn)品：水質(zhì)糞大腸菌群快速檢驗紙片-農(nóng)殘速測試劑盒
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