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常見致病微生物的檢測 水質(zhì)微生物
閱讀:1680發(fā)布時間:2018-10-10
一、水質(zhì)微生物及指示菌
在各種水體,,特別是污染水體中存在有大量的有機物質(zhì),,適于各種微生物的生長,因此水體是僅次于土壤的第二種微生物天然培養(yǎng)基,。水體中的微生物主要來源于土壤,,以及人類的動物的排泄物及污染。水體中微生物的數(shù)量和種類受各種環(huán)境條件的制約,。
一般認為,,水中微生物以革蘭氏陰性桿菌占有較大優(yōu)勢。與其他水體相比,,河水及溪水中革蘭氏陽性菌相對較多,,這是因為陸地微生物沖洗污染的緣故。
水體中的致病性微生物一般并不是水中原有微生物,,大部分是從外界環(huán)境污染而來,,特別是人和其它溫血動物的糞便污染。水中常見的致病性細菌主要包括:志賀氏菌,、沙門氏菌,、大腸桿菌、小腸結(jié)炎耶爾森氏菌,、霍亂弧菌,、副溶血性弧菌等。
在實際控制中,,對水質(zhì)衛(wèi)生質(zhì)量的評價和控制,,是無法對各種可能存在的致病微生物一一進行檢測,,而一般利用對指示菌的檢測和控制,來了解水體是否受到過人畜糞便的污染,,是否有腸道病原微生物存在的可能,,從而評價水的質(zhì)量,以保證水質(zhì)的衛(wèi)生安全,。
目前,,世界各國一般認為大腸菌群是指示水質(zhì)受糞便污染較好的指示菌。
我國水質(zhì)控制也采用大腸菌群作為指示菌,,GB5749-85《中華人民共和國國家標準 生活飲用水衛(wèi)生標準》規(guī)定,,生活飲用水中大腸菌群每升不得超過3個。
在某些情況下,,水體中的細菌總數(shù)也可指示水體受糞便等污染物污染的情況,。這里的細菌總數(shù)其實是指營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)后形成的菌落總數(shù)。目前世界各國對于控制飲用水的衛(wèi)生質(zhì)量,,除采用大腸菌群等指標外,,一般還采用細菌總數(shù)這個指標。我國GB5749-85《中華人民共和國國家標準 生活飲用水衛(wèi)生標準》中規(guī)定生活飲用水細菌總數(shù)每毫升不得超過100個,。
二,、水質(zhì)微生物檢驗方法
GB5750-85《中華人民共和國國家標準 生活飲用水標準檢驗法》提供了水質(zhì)中細菌總數(shù)和總大腸菌群的檢測方法。
(一)細菌總數(shù)的檢測:
國家標準中,,細菌總數(shù)是指1ml水樣在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中,,于37℃經(jīng)24h培養(yǎng)后,所生長的細菌菌落的總數(shù),。
對生活飲用水,,直接吸取1ml水樣于平皿中,加入營養(yǎng)瓊脂后混勻,,37℃培養(yǎng)24h,,進行計數(shù)。
對水源水,,根據(jù)情況對樣品進行10倍梯度稀釋,,選擇適宜稀釋液1ml,加注平皿,,營養(yǎng)瓊脂混勻,,37℃培養(yǎng)24h,進行計數(shù),。
按照規(guī)定格式報告每毫升水中細菌總數(shù),。
(二)總大腸菌群的檢測:
國家標準中,利用總大腸菌群作為糞便污染的指標,??偞竽c菌群是指一群需氧及兼性厭氧的,,37℃生長時能使乳糖發(fā)酵,在24h內(nèi)產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽胞桿菌,。水樣中總大腸菌群數(shù)的含量,,表明水被糞便污染的程度,而且間接地表明有腸道致病菌存在的可能,。
國家標準提供了多管發(fā)酵法及濾膜法檢測總大腸菌群的方法,。
多管發(fā)酵法檢測總大腸菌群,分為三步:初發(fā)酵試驗,,平板分離,,復發(fā)酵證實試驗。初發(fā)酵試驗,,采用乳糖蛋白胨培養(yǎng)液37℃培養(yǎng)24h,,觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況。對陽性管培養(yǎng)物,,接種于品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基或伊紅美藍培養(yǎng)基,,觀察菌落特征,并進行革蘭氏染色和鏡檢,。對典型和可疑菌落,,接種于乳糖蛋白胨培養(yǎng)液,,進行復發(fā)酵證實試驗,,并根據(jù)標準所附檢數(shù)表報告結(jié)果。
其中,,對生活飲用水,,初發(fā)酵試驗接種水樣總量300ml,即100ml接種2管,,10ml接種10管,,采用兩個稀釋度,12支發(fā)酵管,。對水源水,,初發(fā)酵試驗接種水樣總量55.5ml,即10ml接種5管,,1ml接種5管,,0.1ml接種10管,共采用三個稀釋度,,15支發(fā)酵管,。兩種接種方法,所用的檢數(shù)表是不同的,。
濾膜法檢測總大腸菌群,,就是利用微孔濾膜,,過濾一定量水樣,將水樣中含有的細菌截留在濾膜上,,然后將濾膜帖放在選擇性培養(yǎng)基上(如品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基),,經(jīng)培養(yǎng)和證實試驗后,直接計數(shù)濾膜上生長的典型大腸菌群菌落,,并計算出每升水樣中含有的總大腸菌群數(shù),。
三、說明:
1.菌落總數(shù)測定中,,應選擇合適的稀釋度進行,。生活飲用水,國家標準規(guī)定每毫升不得超過100個,,因此可以直接吸取1毫升到平板進行培養(yǎng),。
2.培養(yǎng)時間。與食品中菌落計數(shù)不同,,測定水中細菌總數(shù),,培養(yǎng)時間采用24h。
3.總大腸菌群的測定方法,,由于飲用水和水源水可能的污染程度不同,,因此采用不同的接種量,檢數(shù)表也不相同,。
4.當接種量超過1毫升時,,一般采用多倍濃度培養(yǎng)液。如配制3倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液50mL,,加入100mL水樣后,,總體積為150mL,培養(yǎng)液恢復到正常濃度,。
5.濾膜法檢測總大腸菌群,,一般在檢測較大量低濁度水樣時采用,大量水樣濾過濾膜后,,水中所含有的所有細菌均截留在濾膜上,。
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