液相色譜柱在使用中zui常見(jiàn)的問(wèn)題就是柱壓升高,，如果柱壓是在長(zhǎng)時(shí)間使用過(guò)程中緩慢增加,，屬于正常現(xiàn)象,。但柱壓在使用過(guò)程中突然升高,，可能的原因有如下幾點(diǎn)：
1、液相色譜柱頭的過(guò)濾篩板堵塞或污染,。
2,、色譜柱頭的填料被樣品污染。
3,、色譜柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機(jī)溶劑,，形成結(jié)晶析出。
4,、流動(dòng)相pH值過(guò)大或過(guò)小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解,。
液相色譜柱解決辦法如下：
1、如確定是色譜柱頭的過(guò)濾篩板被污染,，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力,，或者卸下色譜柱頭，將其放在10%的稀硝酸內(nèi)超聲清洗10分鐘,，后再用純水超聲10分鐘,，重新裝入色譜柱。
2,、如確定色譜柱頭的填料被污染,，將柱頭螺絲卸下，挖出柱內(nèi)前段被污染的填料,，用相同的柱填料重新填入，仔細(xì)修復(fù)后,，重新安裝上柱頭螺絲,。
3、如確定定是鹽結(jié)晶,，用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內(nèi)鹽全部溶解,，再換高濃度甲醇,。
4、如果因pH值使用不當(dāng),，很難恢復(fù),。
選擇液相色譜柱之前，先多了解自己的樣品和雜質(zhì),，他們的類(lèi)型結(jié)構(gòu),、極性、酸堿性,、分子量大小等等,，
1、樣品是極性的且弱酸性的,；就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測(cè),，即要選擇承受100%純水且對(duì)極性化合物保留很好的色譜柱
2、如果樣品極性太強(qiáng),，或酸性太強(qiáng),；可以選擇CN，NH2,，或硅膠柱,，也有使用C18+強(qiáng)陰離子對(duì)試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱（缺點(diǎn)是離子對(duì)試劑平衡時(shí)間長(zhǎng)，對(duì)流動(dòng)相pH要求比較精密,，否 則很難重復(fù)實(shí)驗(yàn),，另外離子對(duì)試劑很難洗下來(lái)，基本上用了離子對(duì)的色譜柱就不能再用于其它實(shí)驗(yàn)）
3,、若樣品是堿性的,；可選擇高純硅膠柱（高純硅膠缺少金屬雜質(zhì)，且硅膠端基封尾）或一些經(jīng)過(guò)修飾的C18柱（如極性嵌入技術(shù)或堿去活技術(shù)等）,，他們都會(huì)減少堿性化合物的拖尾,，一般會(huì)選擇中性或偏堿的條件下做，因?yàn)檫@樣可增加堿性樣品的保留
4,、如果堿性化合物的極性太強(qiáng),，或堿性太強(qiáng)；可以選擇寬色譜柱在高pH值檢測(cè)（優(yōu)點(diǎn)是方法開(kāi)發(fā)簡(jiǎn)單,，缺點(diǎn)是目前實(shí) 現(xiàn)這一技術(shù)的色譜柱品牌比較少,，價(jià)格也高）或者選用液相色譜柱（硅膠柱在反相條件下使用，這也是很經(jīng)典的檢測(cè)堿性樣品的方法）選擇強(qiáng)離子交換柱（缺點(diǎn) 是不能用來(lái)分析其它樣品,，對(duì)流動(dòng)相pH要求比較精密,，否則很難重復(fù)實(shí)驗(yàn)）也有使用C18+強(qiáng)陰離子對(duì)試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱。
