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色譜柱常見操作維護
一、正確使用緩沖鹽
緩沖鹽通常易溶于水,,難溶于有機溶劑,,因此緩沖鹽使用不當(dāng)會使其析出,堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙,,使填料板結(jié),,柱壓上升;同時阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展,,使色譜柱的保留能力下降,,柱效降低。緩沖鹽析出后,,去除非常困難,,因此,正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱使用壽命非常重要,。
正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出,,因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結(jié)為一句話:使用前要過濾,,使用后要沖洗。具體方法如下:
1,、等度條件:使用緩沖鹽前和使用后需用過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min,;使用后去除緩沖鹽的另一個方法是用過渡流動相以0.2ml/min流速沖洗色譜柱。
2,、梯度條件:用含有緩沖鹽的流動相跑梯度之前,,用與初始流動相組成相同的過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min,再用該過渡流動相以1.0ml/min沖洗色譜柱120min,。含緩沖鹽流動相的梯度設(shè)定應(yīng)盡量平緩,,以避免梯度過程中緩沖鹽析出。
注意:過渡流動相是指有機相和水相的組成與分析流動相相同,,區(qū)別只是過渡流動相不含緩沖鹽,。
3、緩沖鹽析出的補救方法:
1)方案1:用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗色譜柱120min
2)方案2:用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱,。
二,、防止強保留物質(zhì)在色譜柱上存留
強保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積,對樣品中的化合物產(chǎn)生額外的保留行為,不僅引起峰型變寬、拖尾,,使柱效下降,,同時也會引起保留時間的變化,累積到一定程度時還會導(dǎo)致柱壓升高。由于強保留物質(zhì)和大分子化合物對色譜分離的影響是一個累積效應(yīng),需要一定的時間才會體現(xiàn)出來,但對許多藥品特別是復(fù)雜樣品而言,,很難判斷其是否是含有強保留物質(zhì),因此要防止強保留物質(zhì)的累積,,需要在每天的日常維護中用純甲醇或乙氰清洗色譜柱,。 clin-lab.com
清洗方法:
1、未使用緩沖鹽:每天分析完成后,,先用上述方法除去緩沖鹽,,然后再用甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min。
2,、使用過緩沖鹽:分析完成后,,先用上述方法除去緩沖鹽,然后在用純甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min
3,、補救方法:
水——乙氰——氯仿(或異丙醇)——乙氰——水
每一步以1.0ml/min流速反向沖洗色譜柱60min,。
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