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伴隨著生命科學(xué),、醫(yī)藥學(xué)及環(huán)境,、食品安全等領(lǐng)域的強(qiáng)勁需求與發(fā)展,已很成熟的HPLC技術(shù)獲得了新的推動(dòng)力,,面臨著新的挑戰(zhàn)和發(fā)展機(jī)遇,。這些新的需求可歸納為:更高的分離效率、更快的分離速度,、更好的化學(xué)穩(wěn)定性,、更大的峰容量和更適宜的分離模式。此外,,針對(duì)痕量樣品的分離分析,,對(duì)檢測(cè)靈敏度也提出了更高的需求。面對(duì)這些挑戰(zhàn)與需求,,作為色譜儀和色譜技術(shù)核心的色譜柱,,近年來發(fā)展迅速,取得了更顯著的發(fā)展,。近年來,,色譜技術(shù)的新進(jìn)展主要包括:細(xì)粒徑填料及色譜柱,、超純硅膠基質(zhì)及高化學(xué)穩(wěn)定性填料、整體柱技術(shù),、親水作用色譜柱等,。
針對(duì)、快速,、高通量的要求,,細(xì)粒徑填料,特別是亞2微米尺度硅膠基質(zhì)填料取得了長(zhǎng)足的發(fā)展,,并直接催生了超也是超高壓色譜系統(tǒng)的出現(xiàn),。早在2005年Waters公司向市場(chǎng)推出了UPLC系統(tǒng),所使用的1.7?m的雜化型填料,;嗣后,,日本分光,、安捷倫,、珀金埃爾默、島津,、戴安等公司也相繼推出了相應(yīng)的超效或超快液相系統(tǒng),。這些系統(tǒng)均使用了亞2微米填料或2微米填料填裝的柱子。但是,,根據(jù)色譜動(dòng)力學(xué)理論可知,,柱子所需壓力將隨粒徑減小呈平方增長(zhǎng),此外,,由于*線速度與粒徑成反比,,此時(shí),若要得到*流速,,還必須提高流速,。綜合考慮兩個(gè)因素,柱壓降將與粒徑的三次方成反比,。因此,,為取得高柱效就必須大幅提高流動(dòng)相的驅(qū)動(dòng)壓力。
傳統(tǒng)的以硅膠為基質(zhì)的HPLC填料,,因其本身性質(zhì)的局限以及殘余硅羥基和雜質(zhì)金屬離子的影響,,存在對(duì)極性溶質(zhì)的非特異性吸附和化學(xué)穩(wěn)定性較差的問題。此問題,,可從三方面入手加以解決:一是采用超純硅膠基球,,二是采用特殊的鍵合試劑和反應(yīng)控制方法,三是發(fā)展聚合基質(zhì)填料,。目前,,這一問題已經(jīng)得到了較好的解決,。
整體柱(monolithic column)是用原位聚合和類似澆鑄的方法制備的整體、連續(xù)的柱體組裝的色譜柱,。整體柱具有雙孔結(jié)構(gòu),,即同時(shí)具有微米級(jí)的大孔和納米級(jí)的小孔,因此,,柱子具有較高的柱效但柱壓卻很低,,H-u曲線也較平坦。此外,,由于基質(zhì)的純度很高,,使得這種整體柱的化學(xué)穩(wěn)定性亦很好。因此,,人們普遍對(duì)其給予厚望,。但是,整體柱柱間重現(xiàn)性問題限制了其更廣泛的應(yīng)用,,是一個(gè)亟待解決的難題,。
生物醫(yī)藥色譜中往往需要面對(duì)強(qiáng)極性化合物的分離問題,但常用的反相色譜對(duì)強(qiáng)極性化合物如糖及糖綴合物,、糖肽等的分離幾乎無能為力,,故而迫切需要發(fā)展新的色譜分離模式。親水作用色譜(HILIC)應(yīng)運(yùn)而生,。此外,,石墨化碳柱因其特殊的選擇性而適用于強(qiáng)極性物質(zhì)的分離?;旌夏J街虮砻媲度霕O性基團(tuán)的方法也可以使其可同時(shí)分離極性和非極性物質(zhì),,在用途上和HILIC具有類似性。
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