熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜,、發(fā)射光譜以及熒光強度,、量子產(chǎn)率、熒光壽命,、熒光偏振等許多物理參數(shù),,從各個角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。應(yīng)用于科研,、化工,、醫(yī)藥、生化、環(huán)保以及臨床檢驗,、食品檢驗,、教學(xué)實驗等領(lǐng)域。
熒光強度容易受外界因素的影響,,如樣品池,、激發(fā)光源、溫度,、溶液的pH值,、溶劑性質(zhì)、其它溶質(zhì),、表面活性劑等都會造成熒光強度的變化,。嚴格控制測試條件對熒光分析來說至關(guān)重要,。
熒光分光光度計測試注意事項:
①樣品應(yīng)盛在四面透光的石英比色皿(熒光池)中,,如果是揮發(fā)性樣品應(yīng)使用帶塞的熒光池,。
②在熒光分析時,,為了得到穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù),,一般需要開機預(yù)熱氙燈大約30min,。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈,預(yù)熱時間可以縮短到10min左右,。對某些易感光,、易分解的熒光物質(zhì),,盡量采用長波長、低人射光強度及短時間光照,。
③溫度變化可引起熒光強度的改變。通常降低溫度,,有利于提高熒光量子產(chǎn)率,,熒光強度增大。溫度影響熒光強度的顯著程度因樣品而異,,大部分熒光物質(zhì)的熒光強度受溫度影響不大,,測試溫度變化不超過±3℃,,對測試結(jié)果幾乎無影響。
④當(dāng)熒光物質(zhì)是弱酸或弱堿時,,溶液的pH對熒光強度有較大影響。因為弱酸或弱堿在不同酸度中,,分子和離子的電離平衡會發(fā)生改變,而熒光物質(zhì)的熒光強度會因其離解狀態(tài)發(fā)生改變,。
⑤分子結(jié)構(gòu)中存在π-π共軛的熒光物質(zhì)在極性溶劑中,,熒光效率顯著增強,。溶液中表面活性劑的加入能夠顯著提高熒光強度,。
⑥測試過程中注意不要肉眼盯著氙燈光源看,,以防對眼睛造成損傷,。
⑦儀器房應(yīng)注意經(jīng)常通風(fēng),,避免產(chǎn)生的臭氧在室內(nèi)富集,。