熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜,、發(fā)射光譜以及熒光強(qiáng)度,、量子產(chǎn)率、熒光壽命,、熒光偏振等許多物理參數(shù),,從各個角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。應(yīng)用于科研,、化工,、醫(yī)藥,、生化、環(huán)保以及臨床檢驗(yàn),、食品檢驗(yàn),、教學(xué)實(shí)驗(yàn)等領(lǐng)域。
熒光強(qiáng)度容易受外界因素的影響,,如樣品池,、激發(fā)光源、溫度,、溶液的pH值,、溶劑性質(zhì)、其它溶質(zhì),、表面活性劑等都會造成熒光強(qiáng)度的變化,。嚴(yán)格控制測試條件對熒光分析來說至關(guān)重要。
熒光分光光度計(jì)測試注意事項(xiàng):
①樣品應(yīng)盛在四面透光的石英比色皿(熒光池)中,,如果是揮發(fā)性樣品應(yīng)使用帶塞的熒光池,。
②在熒光分析時,為了得到穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù),,一般需要開機(jī)預(yù)熱氙燈大約30min,。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈,預(yù)熱時間可以縮短到10min左右,。對某些易感光,、易分解的熒光物質(zhì),盡量采用長波長,、低人射光強(qiáng)度及短時間光照,。
③溫度變化可引起熒光強(qiáng)度的改變。通常降低溫度,,有利于提高熒光量子產(chǎn)率,,熒光強(qiáng)度增大。溫度影響熒光強(qiáng)度的顯著程度因樣品而異,,大部分熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度受溫度影響不大,,測試溫度變化不超過±3℃,對測試結(jié)果幾乎無影響,。
④當(dāng)熒光物質(zhì)是弱酸或弱堿時,,溶液的pH對熒光強(qiáng)度有較大影響。因?yàn)槿跛峄蛉鯄A在不同酸度中,,分子和離子的電離平衡會發(fā)生改變,,而熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度會因其離解狀態(tài)發(fā)生改變。
⑤分子結(jié)構(gòu)中存在π-π共軛的熒光物質(zhì)在極性溶劑中,熒光效率顯著增強(qiáng),。溶液中表面活性劑的加入能夠顯著提高熒光強(qiáng)度,。
⑥測試過程中注意不要肉眼盯著氙燈光源看,以防對眼睛造成損傷,。
⑦儀器房應(yīng)注意經(jīng)常通風(fēng),,避免產(chǎn)生的臭氧在室內(nèi)富集。