方便快捷的分析過程固然重要，但是為了多做樣品而忽略了一些*的步驟，往往得不償失,。哪些操作不能做,？哪些懶兒不能偷？那些小概率的故障師傅沒教怎么辦,？液相使用過程中有哪四大關(guān)鍵因素要注意,？

流動相不過濾
  因為塵埃或其它任何雜質(zhì)微粒都會磨損柱塞,、密封環(huán),、缸體和單向閥，因此應(yīng)預(yù)先除去流動相中的任何固體微粒,。流動相在玻璃容器內(nèi)蒸餾,，而常用的方法是濾過，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器,。泵的入口都應(yīng)連接砂濾棒（或片）,。輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常清洗或更換。
使用后沒有及時清洗泵
  流動相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì),，含有緩沖液的流動相不應(yīng)保留在泵內(nèi),，尤其是在停泵過夜或更長時間的情況下。如果將含緩沖液的流動相留在泵內(nèi),，由于蒸發(fā)或泄漏,，甚至只是由于溶液的靜置,，就可能析出鹽的微細晶體,，這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等。因此,，必須泵入純水將泵充分清洗后,，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護的溶劑（對于反相鍵合硅膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）,。
流動相走空
  泵工作時要留心防止溶劑瓶內(nèi)的流動相被用完,，否則空泵運轉(zhuǎn)也會磨損柱塞、缸體或密封環(huán),，zui終產(chǎn)生漏液,。
沒有流動相流出，又無壓力指示怎么辦,？
可能是泵內(nèi)有大量氣體,，這時可打開泄壓閥，使泵在較大流量（如5ml/min）下運轉(zhuǎn),，將氣泡排盡,，也可用一個50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個可能原因是密封環(huán)磨損，需更換,。
壓力和流量不穩(wěn)了,？
原因可能是氣泡，需要排除,；或者是單向閥內(nèi)有異物,，可卸下單向閥，浸入丙酮內(nèi)超聲清洗,。有時可能是砂濾棒內(nèi)有氣泡,，或被鹽的微細晶粒或滋生的微生物部分堵塞,，這時,，可卸下砂濾棒浸入流動相內(nèi)超聲除氣泡，或?qū)⑸盀V棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）內(nèi)迅速除去微生物,，或?qū)Ⅺ}溶解,，再立即清洗。
壓力為啥過高或過低,？
可能是是管路被堵塞,，需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏,。檢查堵塞或泄漏時應(yīng)逐段進行,。
在進行梯度洗脫時，由于多種溶劑混合,，而且組成不斷變化,，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視：
梯度洗脫的流動相選擇不當
要注意溶劑的互溶性,，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相,。有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶，超出范圍后就不互溶,，使用時更要引起注意,。當有機溶劑和緩沖液混合時，還可能析出鹽的晶體,，尤其使用磷酸鹽時需特別小心,。
忽略的空白梯度洗脫
梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高，以保證良好的重現(xiàn)性,。進行樣品分析前必須進行空白梯度洗脫,，以辨認溶劑雜質(zhì)峰，因為弱溶劑中的雜質(zhì)富集在色譜柱頭后會被強溶劑洗脫下來,。用于梯度洗脫的溶劑需*脫氣,，以防止混合時產(chǎn)生氣泡,。
忽略了溶劑混合所帶來的粘度變化
混合溶劑的粘度常隨組成而變化，因而在梯度洗脫時常出現(xiàn)壓力的變化,。例如甲醇和水粘度都較小,，當二者以相近比例混合時粘度增大很多，此時的柱壓大約是甲醇或水為流動相時的兩倍,。因此要注意防止梯度洗脫過程中壓力超過輸液泵或色譜柱能承受的zui大壓力,。
關(guān)于六通閥的正確使用和維護：
①樣品溶液進樣前必須用0.45μm濾膜過濾，以減少微粒對進樣閥的磨損,。
②轉(zhuǎn)動閥芯時不能太慢,，更不能停留在中間位置，否則流動相受阻,，使泵內(nèi)壓力劇增,，甚至超過泵的zui大壓力；再轉(zhuǎn)到進樣位時,，過高的壓力將使柱頭損壞,。
③為防止緩沖鹽和樣品殘留在進樣閥中，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進樣閥,。通?？捎盟疀_洗，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗,，再用水沖洗,。
關(guān)于色譜柱的使用和維護　　
色譜柱的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會降低柱效,、縮短使用壽命甚至損壞,。在色譜操作過程中，需要注意下列問題,，以維護色譜柱,。
調(diào)節(jié)流速太快
避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況,；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料,，因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩（如前所述）,。
反沖色譜柱
一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時,，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì),。否則反沖會迅速降低柱效。
預(yù)柱和保護柱
選擇使用適宜的流動相（尤其是pH）,，以避免固定相被破壞,。有時可以在進樣器前面連接一預(yù)柱,，分析柱是鍵合硅膠時，預(yù)柱為硅膠,，可使流動相在進入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”,，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi),，需要對樣品進行預(yù)處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱,。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換,。