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簡單的說色譜柱是一種硬件,而柱色譜則是一種技術(shù),,柱色譜法,,又稱層析法,是一種以分配平衡為機理的分配方法,。
柱色譜概念:
柱色譜是在一根玻璃管或金屬管中進行的色譜技術(shù),,將吸附劑填充到管中而使之成為柱狀,這樣的管狀柱稱為吸附色譜柱,。使用吸附色譜柱分離混合物的方法,,稱為吸附柱色譜。這種方法可以用來分離大多數(shù)有機化合物,,尤其適合于復(fù)雜的天然產(chǎn)物的分離,。分離容量從幾毫克到百毫克級,所以,,適用于分離和精制較大量的樣品。
在吸附柱色譜中,,吸附劑是固定相,,洗脫劑是流動相,相當(dāng)于薄層色譜中的展開劑,。吸附劑的基本原理與吸附薄層色譜相同,,也是基于各組分與吸附劑間存在的吸附強弱差異,通過使之在柱色譜上反復(fù)進行吸附,、解吸,、再吸附、再解吸的過程而完成的,。所不同的是,,在進行柱色譜的過程中,混合樣品一般是加在色譜柱的頂端,,流動相從色譜柱頂端流經(jīng)色譜柱,,并不斷地從柱中流出。由于混合樣中的各組分與吸附劑的吸附作用強弱不同,,因此各組分隨流動相在柱中的移動速度也不同,,zui終導(dǎo)致各組分按順序從色譜柱中流出。如果分步接收流出的洗脫液,,便可達到混合物分離的目的,。一般與吸附劑作用較弱的成分先流出,與吸附作用較強的成分后流出。
色譜柱概念:
裝填有固定相用以分離混合組分的柱管,,多為金屬,、PEEK或玻璃制作。有直管形,、盤管形,、U形管等形狀,色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類,,液相色譜通常均采用填充柱,,色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相,,以及色譜柱的制備和操作條件。
色譜是一種分離分析手段,,分離是核心,,因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高,、選擇性好,,分析速度快等,。市售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相,、氧化鋁,、有機聚合物微球(包括離子交換樹脂),、多孔碳等,,其粒度一般為3,5,7,10μm等,,柱效理論值可達5-16萬/米。對于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效,;對于同系物分析,,只要500即可;對于較難分離物質(zhì)對則可采用高達2萬的柱子,,因此一般10-30cm左右的柱長就能滿足復(fù)雜混合物分析的需要,。
柱效受柱內(nèi)外因素影響,為使色譜柱達到*效率,,除柱外死體積要小外,還要有合理的柱結(jié)構(gòu)(盡可能減少填充床以外的死體積)及裝填技術(shù),。即使的裝填技術(shù),,在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的,靠近管壁的部位比較疏松,,易產(chǎn)生溝流,,流速較快,,影響沖洗劑的流形,使譜帶加寬,,這就是管壁效應(yīng),。這種管壁區(qū)大約是從管壁向內(nèi)算起30倍粒徑的厚度。在一般的液相色譜系統(tǒng)中,,柱外效應(yīng)對柱效的影響遠遠大于管壁效應(yīng),。
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