目前還有傳統(tǒng)做法仍然存在于HPLC的技術(shù)應(yīng)用中,，而這些做法其實非常不利于HPLC技術(shù)的效率提高、運(yùn)行成本的降低以及運(yùn)行時間的縮短,。本文中將提出一些可行的傳統(tǒng)做法的替代方法,，有些人可能會對這些替代方法出現(xiàn)爭議，但如果應(yīng)用得當(dāng)?shù)脑?，這些替代方法勢必會產(chǎn)生顯著的效果,。因為相比不停地機(jī)械勞作，分析科學(xué)家應(yīng)該更聰明地工作,。

常見錯誤之一——色譜柱用粒徑5µm的顆粒填充

    回想一下,，多年來標(biāo)準(zhǔn)HPLC分析柱(250mm×4.6mm)都是采用5µm 粒徑顆粒填裝的，然而,，事實上3µm 粒徑顆粒填裝的色譜柱(150mm×4.6mm)具有更好的分離效果及更短的分析時間,。同時，現(xiàn)在許多實驗室標(biāo)配的色譜儀是超高壓液相色譜(UHPLC)和液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS),，所以色譜柱更應(yīng)該換成3µm 或2µm 填裝的色譜柱,。值得注意的是：3µm 粒徑顆粒填裝的色譜柱進(jìn)口孔隙更小，更容易被“臟”的樣品堵塞,。

常見錯誤之二——使用4.6mm內(nèi)徑色譜柱(1mL/min)

    自20世紀(jì)70年代初,，HPLC分析柱的“標(biāo)準(zhǔn)”內(nèi)徑就已經(jīng)是4.6mm了，而近年來,，在努力減少溶劑消耗,、節(jié)約樣品的目標(biāo)下，許多實驗室已經(jīng)開始將3.0mm內(nèi)徑的色譜柱作為更好的選擇,，來代替使用4.6mm內(nèi)徑色譜柱了,。如果使用現(xiàn)代的中間分散HPLC的話，柱率和柱外頻帶展寬的效果通常不會受到任何負(fù)面影響,?？傊褂幂^小內(nèi)徑的色譜柱是有利的，在梯度洗脫條件下可以獲得更高的分辨率,。

常見錯誤之三——對HPLC的流動相進(jìn)行過濾

    通常經(jīng)凈化系統(tǒng)所得的HPLC級溶劑和水已經(jīng)足夠干凈了,，如果我們再給它一次額外的過濾，那只會適得其反,，引入不必要的化學(xué)污染,。事實上，許多實驗室都有自己的一套色譜儀器保養(yǎng)維修計劃,，每年對HPLC系統(tǒng)中的過濾器進(jìn)行更換,，所以我們沒有必要再對流動相進(jìn)一步過濾。例外的是：如果你使用的是離子對試劑,、低純度緩沖劑或高鹽含量的流動相時,，仍然強(qiáng)烈建議你對流動相進(jìn)行過濾。還有一種情況是有必要進(jìn)行額外過濾的,，即如果由于水源的質(zhì)量不好或者其他原因?qū)е聫膬艋到y(tǒng)流出的水不夠干凈的時候,。

常見錯誤之四——使用緩沖劑流動相

     當(dāng)分析酸性或者堿性分析物的時候，有必要對流動相進(jìn)行酸化或者堿化,。簡單的流動相如含0.1%(體積比)甲酸的水溶液，僅需要將1mL甲酸定容到1升水中即可迅速制備,。同樣,，含0.1%(體積比)氨的水溶液可以用于多種高pH值兼容柱。當(dāng)使用低硅羥基活性柱時,，無論用低還是高pH值流動相運(yùn)行,，緩沖劑其實都很少用到，包括以流動相A為稀釋劑配制進(jìn)樣樣品溶液時,。例外的是：當(dāng)分析復(fù)雜分子,、復(fù)雜混合物時，可能仍然需要用緩沖劑流動相,，以保持高的選擇性和特別適中的pH值的流動相,。

常見錯誤之五——每次試驗都重新配制新的參考標(biāo)準(zhǔn)溶液

    在藥品的質(zhì)量控制實驗室中，往往每個試驗都會重新配制新的參考標(biāo)準(zhǔn)溶液,，實際上這是沒有必要的,。許多藥物在低溫和適當(dāng)?shù)馁A存條件下溶液具有足夠的穩(wěn)定性。所以你可以一次性配制幾百個合格的參考標(biāo)準(zhǔn)溶液置于HPLC小瓶中,，然后冷藏或冷凍貯存供以后分析用,。而對于試驗結(jié)果的長期穩(wěn)定性研究來說，更應(yīng)該采用由同一個原始溶液配制而成的標(biāo)準(zhǔn)溶液,。當(dāng)然,，對于通常的試驗，標(biāo)準(zhǔn)溶液的儲存條件下的穩(wěn)定性(保質(zhì)期)是應(yīng)該經(jīng)過驗證的，并記錄配制時間,。這里值得我們注意的是：所有的操作都需要做好記錄,。

常見錯誤之六——對樣品瓶進(jìn)行搖動

   搖動(或反轉(zhuǎn))樣品瓶會在樣品瓶蓋下面形成一層液體膜，這會對HPLC自動進(jìn)樣器造成干擾以至于給出一個混亂的試驗結(jié)果,。所以即使在排除了故障的情況下,，也要始終警惕這一點(diǎn)。

例外的是：如果樣品是冷凍過的,，那么解凍后,，需要進(jìn)行渦旋或搖動以確保樣品均勻。

常見錯誤之七——使用不銹鋼卡套作為柱的接頭

    HPLC系統(tǒng)通常安裝有不銹鋼接頭和套圈,，大多數(shù)情況下它們工作得都很好,，但是它們不適合用于需要頻繁更換色譜柱時的連接。首先,，不銹鋼卡套只能與為其量身定制的端部管接頭相匹配,，而對于不同的色譜柱來說這種“量身定制”只會適得其反。

    其次,，預(yù)制的不銹鋼接頭只能夠重復(fù)密封5-10次,。當(dāng)某些制造商的不銹鋼接頭用于其他品牌的色譜柱時，由于不同端部接頭和插入深度的關(guān)系,，這個問題會變得尤其明顯,。一個可能的解決方案是使用可以用手指擰緊的聚醚醚酮(PEEK)管件，它們價格低廉,，并且在5000psi(34.47MPa)壓力下的密封效果也很好,。許多較新的UHPLC接頭，其額定壓力為20,000psi(137.9MPa),，只需用手指擰緊,，然后用扳手再轉(zhuǎn)四分之一圈就可以了。