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分光光度計(jì)使用測試誤區(qū)
01
復(fù)色光對朗伯-比爾定律的偏離
朗伯-比爾定律成立的前提條件是入射光是單色光,，但是精度再高的儀器，即使是雙單色器的分光光度計(jì),，也只能獲得近乎單色的光,，無法獲得純單色光，它仍然含有狹窄光通帶,，具有復(fù)色光的性質(zhì),。而復(fù)色光會(huì)導(dǎo)致朗伯-比爾定律的正或負(fù)偏離。
固定狹縫的紫外分光光度計(jì)光譜帶寬一般為1nm或2nm,，可調(diào)狹縫的可以做到0.Inm,；可見分光光度計(jì)帶寬6nm,、甚至十幾納米,。
光譜帶寬應(yīng)該是越小越好,，但是隨著光譜分辨率的提高，儀器的靈敏度降低,，所以選擇儀器時(shí)要綜合考慮各種條件的影響,。當(dāng)溶液濃度較小且單色光較純時(shí)，可近似認(rèn)為符合朗伯-比爾定律定律,。
02
雜散光的影響
雜散光是指進(jìn)人檢測器的處于待測波長光譜帶寬范圍外的其他波長組分,，它是光譜測量中誤差的主要來源。
產(chǎn)生原因有:分光光度計(jì)的色散元件,、反射鏡,、透鏡及單色器內(nèi)壁灰塵等。在分光光度計(jì)工作波段邊緣波長處,，由于單色器透光率,、光源輻射強(qiáng)度、檢測器靈敏度都較低,，雜散光的影響更為顯著,。
雜散光限制儀器的分析上限可引起嚴(yán)重的測量誤差，實(shí)際工作中,，在定量分析時(shí),，一般在吸收峰或其附近處測量樣品吸光度，如果在分析波長處含有雜散光,，這時(shí)樣品的透光率較小,，而雜散光大部分透過，使測量吸光度低于真實(shí)吸光度,。
03
儀器噪聲對測T的影響
儀器噪聲也是儀器的一個(gè)重要指標(biāo),，它表征儀器做稀溶液的能力。是疊加在待測量的分析信號中的不需要的信號,，掃描100%T和0%T線,，可觀察到分光光度計(jì)的噪聲水平，如果儀器噪聲較大,，會(huì)掩蓋較小的測量信號,，一般用噪音的二倍來表示儀器的靈敏度。
04
波長和吸光度準(zhǔn)確度
樣品的每一個(gè)值都是在一定的波長下測得的,，如果波長誤差很大,，測出的值肯定不準(zhǔn)。吸光度準(zhǔn)確度也是用戶對儀器的直接要求,，更應(yīng)引起足夠的重視,。
國家計(jì)量檢定規(guī)程規(guī)定雙光束紫外可見分光光度計(jì)透射比準(zhǔn)確度為*士0.6%， B級土1.0%,。