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微生物檢測(cè)中常用滅菌和消毒方法
微生物檢測(cè)中常用滅菌和消毒方法
消毒和滅菌兩個(gè)詞在實(shí)際使用中常被混用,，其實(shí)它們的含義是有所不同的,。消毒是指應(yīng)用消毒劑等方法殺滅物體表面和內(nèi)部的病原菌營(yíng)養(yǎng)體的方法，而滅菌是指用物理和化學(xué)方法殺死物體表面和內(nèi)部的所有微生物,，使之呈無菌狀態(tài),。
物理方法
溫度：
利用溫度進(jìn)行滅菌、消毒或防腐,，是zui常用而又方便有效的方法,。高溫可使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和酶類發(fā)生變性而失活，從而起滅菌作用,，低溫通常起抑菌作用,。
1.干熱滅菌法：
a.灼燒滅菌法：
利用火焰直接把微生物燒死。此法*可靠,，滅菌迅速,，但易焚毀物品，所以使用范圍有限,，只適合于接種針,、環(huán)、試管口及不能用的污染物品或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物的尸體等的滅菌,。
b.干熱空氣滅菌法：
這是實(shí)驗(yàn)室中常用的一種方法,，即把待滅菌的物品均勻地放入烘箱中，升溫至160℃,，恒溫1小時(shí)即可,。此法適用于玻璃皿、金屬用具等的滅菌,。
2.濕熱滅菌法：
在同樣的溫度下,，濕熱滅菌的效果比干熱滅菌好,，這是因?yàn)橐环矫婕?xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)含水量高，容易變性,。另一方面高溫水蒸汽對(duì)蛋白質(zhì)有高度的穿透力,，從而，加速蛋白質(zhì)變性而迅速死亡,。
a.巴氏消毒法：
有些食物會(huì)因高溫破壞營(yíng)養(yǎng)成分或影響質(zhì)量,，如，牛奶,、醬油,、啤酒等，所以只能用較低的溫度來殺死其中的病原微生物,，這樣既保持食物的營(yíng)養(yǎng)和風(fēng)味,，又進(jìn)行了消毒，保證了食品衛(wèi)生,。該法一般在62℃,，30分鐘即可達(dá)到消毒目的。此法為法國微生物學(xué)家巴斯德*,，故名為巴氏消毒法,。
b.煮沸消毒法：
直接將要消毒的物品放入清水中，煮沸15分鐘,，即可殺死細(xì)菌的全部營(yíng)養(yǎng)和部分芽孢。若在清水中加入1%碳酸鈉或2%的石炭酸,，則效果更好,。此法適用于注射器、毛巾及解剖用具的消毒,。
c.間歇滅菌法：
上述兩種方法在常壓下,，只能起到消毒作用，而很難做到*無菌,。若采用間歇滅菌的方法,，就能殺滅物品中所有的微生物。具體做法是：將待滅菌的物品加熱至100℃,，15～30分鐘,，殺死其中的營(yíng)養(yǎng)體。然后冷卻,，放入37℃恒溫箱中過夜,，讓殘留的芽孢萌發(fā)成營(yíng)養(yǎng)體。第2天再重復(fù)上述步驟,，三次左右,，就可達(dá)到滅菌的目的,。此法不需加壓滅菌鍋，適于推廣,，但操作麻煩,，所需時(shí)間長(zhǎng)。
d.加壓蒸汽滅菌法：
這是發(fā)酵工業(yè),、醫(yī)療保健,、食品檢測(cè)和微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中zui常用的一種滅菌方法。它適用于各種耐熱,、體積大的培養(yǎng)基的滅菌,，也適用于玻璃器皿、工作服等物品的滅菌,。
加壓蒸汽滅菌是把待滅菌的物品放在一個(gè)可密閉的加壓蒸汽滅菌鍋中進(jìn)行的,，以大量蒸汽使其中壓力升高。由于蒸汽壓的上升,，水的沸點(diǎn)也隨之提高,。在蒸汽壓達(dá)到1.055公斤/厘米2時(shí)，加壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)的溫度可達(dá)到121℃,。在這種情況下,，微生物（包括：芽孢）在15～20分鐘便會(huì)被殺死，而達(dá)到滅菌目的,，如,，滅菌的對(duì)象是砂土、石蠟油等面積大,、含菌多,、傳熱差的物品，則應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)滅菌時(shí)間,。
在加壓蒸汽滅菌中,，要引起注意的一個(gè)問題是，在恒壓之前,，一定要排盡滅菌鍋中的冷空氣,，否則表上的蒸汽壓與蒸汽溫度之間不具對(duì)應(yīng)關(guān)系，這樣會(huì)大大降低滅菌效果,。
3.影響滅菌的因素：
a.不同的微生物或同種微生物的不同菌齡對(duì)高溫的敏感性不同,。多數(shù)微生物的營(yíng)養(yǎng)體和病毒在50～65℃，10分鐘就會(huì)被殺死,；但各種孢子,、特別是芽孢zui能抗熱，其中抗熱性zui強(qiáng)的是嗜熱脂肪芽孢桿菌,，要在121℃,，12分鐘才被殺死,。對(duì)同種微生物來講，幼齡菌比老齡菌對(duì)熱更敏感,。
b.微生物的數(shù)量多少顯然會(huì)影響滅菌的效果,，數(shù)量越多，熱死時(shí)間越長(zhǎng),。
c.培養(yǎng)基的成分與組成也會(huì)影響滅菌效果,。一般地講，蛋白質(zhì),、糖或脂肪存在,，則提高抗熱性，pH在7附近,，抗熱性zui強(qiáng),，偏向兩極，則抗熱能力下降,，而不同的鹽類可能對(duì)滅菌產(chǎn)生不同的影響,；固體培養(yǎng)基要比液體培養(yǎng)基滅菌時(shí)間長(zhǎng)。
4.滅菌對(duì)培養(yǎng)基成分的影響：
a.pH值普遍下降,。
b.產(chǎn)生混濁或沉淀,，這主要是由于一些離子發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而產(chǎn)生混濁或沉淀。
例如,Ca2+與PO4-3化合,，就會(huì)產(chǎn)生磷酸鈣沉淀,。
c.不少培養(yǎng)基顏色加深。
d.體積和濃度有所變化,。
e.營(yíng)養(yǎng)成分有時(shí)受到破壞,。
輻射
利用輻射進(jìn)行滅菌消毒，可以避免高溫滅菌或化學(xué)藥劑消毒的缺點(diǎn),，所以應(yīng)用越來越廣，目前主要應(yīng)用在以下幾個(gè)方面：
1）接種室,、手術(shù)室,、食品、藥物包裝室常應(yīng)用紫外線殺菌,。
2）應(yīng)用β射線作食品表面殺菌,，γ射線用于食品內(nèi)部殺菌。經(jīng)輻射后的食品,，因大量微生物被殺滅,，再用冷凍保藏，可使保存期延長(zhǎng),。
過濾
采用機(jī)械方法,，設(shè)計(jì)一種濾孔比細(xì)菌還小的篩子,，做成各種過濾器。通過過濾,，只讓液體培養(yǎng)基從篩子中流下,，而把各種微生物菌體留在篩子上面，從而達(dá)到除菌的目的,。這種滅菌方法適用于一些對(duì)熱不穩(wěn)定的體積小的液體培養(yǎng)基的滅菌以及氣體的滅菌,。它的zui大優(yōu)點(diǎn)是不破壞培養(yǎng)基中各種物質(zhì)的化學(xué)成分。但是比細(xì)菌還小的病毒仍然能留在液體培養(yǎng)基內(nèi),，有時(shí)會(huì)給實(shí)驗(yàn)帶來一定的麻煩,。