純度	99.7	供貨周期	現(xiàn)貨
規(guī)格	10mg;50mg	貨號(hào)	S7207
應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè)	主要用途	科研實(shí)驗(yàn)

基本信息

產(chǎn)品名稱：Bisindolylmaleimide IX (Ro 31-8220) Mesylate

Bisindolylmaleimide IX (Ro 31-8220 Mesylate)是一種pan-PKC抑制劑，作用于PKC-α,， PKC-βI,， PKC-βII,， PKC-γ和PKC-ε，IC50分別為5 nM,， 24 nM,， 14 nM， 27 nM和24 nM,，也有效抑制MAPKAP-K1b,， MSK1， GSK3β和S6K1,。

產(chǎn)品描述

Bisindolylmaleimide IX (Ro 31-8220 Mesylate)是一種pan-PKC抑制劑,，作用于PKC-α， PKC-βI,， PKC-βII,， PKC-γ和PKC-ε，IC50分別為5 nM,， 24 nM,， 14 nM， 27 nM和24 nM,，也有效抑制MAPKAP-K1b,， MSK1， GSK3β和S6K1,。

靶點(diǎn)

PKCα ^[1] (Cell-free assay)	PKCβ2 ^[1] (Cell-free assay)	PKCβ1 ^[1] (Cell-free assay)	PKCε ^[1] (Cell-free assay)	PKCγ ^[1] (Cell-free assay)
5 nM	14 nM	24 nM	24 nM	27 nM

體外研究(In Vitro)
體外研究活性	RO31-8220抑制大鼠腦蛋白激酶C活性,，IC 50為23 nM，在PKC-α,，PKC-β,，PKC-γ，PKC-ε之間沒有選擇性,。^[1] RO31-8220也抑制MSK1,，MAPKAPK1，RSK,，GSK3β和S6K1,，具有對(duì)PKC相似的效力。此外,，RO31-8220抑制電壓依賴性鈉離子通道,。^[2] RO31-8220改變細(xì)胞蛋白激酶C的定位并有效抑制A549細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng)，IC 50分別為0.78 μM和0.897μM,。^[3] 在兒茶酚胺低反應(yīng)血小板中,，RO31-8220通過增強(qiáng)Akt的磷酸化增強(qiáng)了腎上腺素誘導(dǎo)的血小板聚集。^[4] 通過抑制apoE基因的囊泡運(yùn)輸?shù)劫\|(zhì)膜,，RO31-8220顯著降低載脂蛋白E從原代人巨噬細(xì)胞的分泌,，沒有顯著影響ApoE的mRNA水平或蛋白水平,。^[5]
激酶實(shí)驗(yàn)	PKC活性檢測(cè)
激酶實(shí)驗(yàn)	測(cè)定混合物含有0.2 mg/mL的γ肽，10 μM氯化鎂,，0.6 mM氯化鈣,，10 μM[[γ-³²P]ATP，1.25 mg/mL的磷脂酰絲和1.25 ng / mL在20mM HEPES（pH值7.5）中的佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯,，2 mM EDTA,，1 mM的二硫蘇糖醇及0.02％（重量/體積）的Triton X-100。肽-γ是一種合成肽,，GPRPLFCRKGSLRQKW,，類似PKC-γ假底物位點(diǎn)，不同的是一個(gè)絲殘基替換的假底物丙,，將所述肽從抑制劑成substrat,。測(cè)定是通過添加2.5 m單位酶來啟動(dòng)，在30℃溫育10分鐘,，并通過點(diǎn)樣到P81紙終止,，接著在75mM的磷酸中充分洗滌。該紙?jiān)儆靡掖枷礈?，干燥,，和結(jié)合的放射性通過liquidscintillation光譜測(cè)定。
細(xì)胞實(shí)驗(yàn)	細(xì)胞系	人肺腺癌A549和MCF-7乳腺癌細(xì)胞
	濃度	2.5 μM
	Bisindolylmaleimide IX (Ro 31-8220) Mesylate孵育時(shí)間	24-48 小時(shí)
	方法	人肺腺癌A549和MCF-7乳腺癌細(xì)胞是從動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)歐洲保藏中心（ATCC）獲得,。細(xì)胞（傳代次數(shù)10-30）在5％二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng),，前者在含青的Ham氏F-12培養(yǎng)基中培養(yǎng)，后者在含丙酮酸（1毫摩爾）和非必需氨基酸的最小必需培養(yǎng)基（Eagle修改）中培養(yǎng),。兩種培養(yǎng)基均補(bǔ)充有10％FCS和谷氨（2毫摩爾）,。細(xì)胞傳代培養(yǎng)每周兩次以保持對(duì)數(shù)增長(zhǎng)。對(duì)細(xì)胞增殖的研究,，細(xì)胞接種和培養(yǎng)用3ml包含試劑的培養(yǎng)基,，其中被補(bǔ)充以48小時(shí)（A549 ）或72小時(shí)（MCF -7）的時(shí)間間隔。在藥物溫育4天（A549）或6天（MCF-7）后,，細(xì)胞數(shù)目用Coulter計(jì)數(shù)器ZM評(píng)估,。為了實(shí)現(xiàn)PKC耗竭，細(xì)胞溫育在bryostatin 1（1 μM）中24小時(shí),。在這些條件下bryostatin1所造成的生長(zhǎng)抑制是微不足道的,。bryostatin在細(xì)胞2小時(shí)恢復(fù)期后充分洗滌除去。在以往使用A549細(xì)胞的研究中,，該洗滌過程已被證明可減少bryostatin介導(dǎo)的效應(yīng),。然后將細(xì)胞溫育與staurosporine，RO 31-8220,，UCN- 01或H- 7再溫浴24小時(shí),。在一些實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞與抑制劑孵育48小時(shí)而不是24小時(shí)，在此情況下bryostation并未除去并留在溫育液中,。去除抑制劑后,，抑制DNA合成是由[³H]Tdr摻入細(xì)胞的測(cè)定進(jìn)行評(píng)價(jià)。放射性用Packard 1500 Tricarb閃爍計(jì)數(shù)器中計(jì)數(shù),。