• 本試劑盒用于體外定量檢測血清,、血漿,、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中人α葡萄糖苷酶（α-glucosidase）的含量,。
• 有效期：6個月
• 保存條件：2-8℃

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預(yù)先包被人α葡萄糖苷酶（α-glucosidase）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人α葡萄糖苷酶（α-glucosidase）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，計算樣品濃度。

樣本處理及要求

1.  血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過后于1000g離心20分鐘,，取上清即可檢測,，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
2.  血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑,，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
3.  細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測,，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注：標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果,，因此溶血標(biāo)本不宜進行此項檢測,。

需要而未提供的試劑和器材

1. 酶標(biāo)儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL,、20-200uL,、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水

試劑盒組成

備注：

1.  標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：48、24,、12,、6、3,、0 U/mL

2.  經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗,，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可,。當(dāng)有部分樣本值超過zui大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時,，可用樣本稀釋液將標(biāo)本進行適當(dāng)稀釋后再進行實驗。

注意事項

1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果,。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑,。
2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果,。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉,。
3. 消除板底殘留的液體和手指印,，否則影響OD值,。
4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不能使用,。
5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果,。
6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上,。
8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體,。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
9. 不能使用過期產(chǎn)品,。
10. 如果可能傳播疾病,，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置,。

試劑準(zhǔn)備

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用,。

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水,。

操作步驟

1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.   設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；
3.   樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加,。
4.   除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5.   棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.   每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。
7.   每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值。

實驗結(jié)果計算

以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程,，計算出樣品的濃度,。

試劑盒性能

1.  檢測范圍：1.5 U/mL – 48 U/mL。
2.  靈敏度：zui低檢測濃度小于0.1 U/mL,。
3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。
4.  重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% ,。