可溶性果膠(WSP)含量試劑盒說(shuō)明書(shū)

分光光度法 50 管/24 樣

正式測(cè)定前取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

果膠是構(gòu)成細(xì)胞初生壁和中膠層的主要成分,，主要由原果膠,、果膠酸甲酯和果膠酸組成。果膠中含有半乳糖醛酸,、乳糖,、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等,，是許多高等植物細(xì)胞壁中含量zui豐富的多糖成分,，其*的物理、化學(xué)性質(zhì)影響著植物源食品的口感和品質(zhì),。果膠間以 Ca²⁺ 橋及其他離子鍵,、氫鍵、糖苷鍵,、酯鍵和苯環(huán)偶聯(lián)的方式交聯(lián),，通過(guò)不同的抽提方法可以提取各種形式的果膠，如水溶性果膠（WSP）,、離子結(jié)合型果膠（ISP）和共價(jià)結(jié)合果膠（CSP）,。

測(cè)定原理：

利用酸溶液提取得到（WSP）可溶性果膠,，采用咔唑比色法測(cè)定果膠含量。果膠水解成半乳糖醛酸,，在硫酸溶液中與咔唑試劑進(jìn)行縮合反應(yīng),，生成物質(zhì)在 530 nm 處有zui大吸收峰。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì),、水浴鍋,、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿,、80％乙醇,、丙酮、濃硫酸（不允許快遞）,、研缽和蒸餾水,。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體 50mL× 1 瓶，4℃保存,。試劑二：液體 50mL× 1 瓶,，4℃保存。試劑三：標(biāo)準(zhǔn)液 1mL× 1 支,，4℃保存,。試劑四：液體 5 mL× 1 瓶，4℃保存,；

樣品的前處理：

1,、 細(xì)胞壁的提取：取約 0.3g 樣本,，加入 1mL 80％乙醇,，室溫快速勻漿，95℃水浴 20min,，冷卻至室溫,，4000g 25℃離心 10min，棄上清,。沉淀加入 1.5mL80％乙醇和丙酮各洗一遍（渦旋振蕩 2min 左右,，4000g 25℃離心 10min，棄上清即可）,，沉淀即為粗細(xì)胞壁，加入 1mL 試劑一（去除淀粉）浸泡 15 小時(shí),，4000g 25℃離心 10min,，棄上清，將沉淀干燥,，稱(chēng)重得細(xì)胞壁物質(zhì)（CWM）,。

2,、 WSP 的提取：稱(chēng)取烘干的 CWM 3mg,，加入 1mL 試劑二,，充分勻漿。8000g 4℃離心 10min,，取上清液待測(cè),。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 530nm 處,，蒸餾水調(diào)零；試劑三和試劑四 37℃ 預(yù)熱 10min 以上,；2,、操作表：

混勻 95℃水浴 5min 后，530nm 處讀取吸光值,，空白管,、標(biāo)準(zhǔn)管、對(duì)照管和測(cè)定管吸光值分別記為 A1,、A2,、A3 和 A4。若 A 大于 2,，需將待測(cè)樣本用蒸餾水稀釋?zhuān)上♂?10 倍或 20倍）,。空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要做一管,，每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管,。

WSP 含量計(jì)算：

WSP 含量(mg /g 干重)= (C 標(biāo)準(zhǔn)×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀釋倍數(shù)=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀釋倍數(shù)

C 標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.05mg/mL,；V1：加入樣本體積,，0.1mL；V2：加入提取液體積,，1mL,；W：樣本干重，g,。

注意：zui低檢測(cè)限為 50μg /g 干重