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細(xì)胞膜的流動性或微粘度

時(shí)間:2016-7-25閱讀:2032
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細(xì)胞膜的流動性或微粘度 

 

    膜的流動性或者微粘度,,可以通過測量結(jié)合到膜雙分子層中的疏水熒光探針的熒光偏振來研究,。因?yàn)闊晒夥肿游掌窆獾膸茁屎桶l(fā)射熒光的偏振度與熒光分子相對于激發(fā)光偏振面的空間取向有關(guān)。

    若以線偏振光激發(fā)隨機(jī)取向的熒光分子,,那么,,與激發(fā)光偏振面取向一致的那些熒光分子具有zui大的吸收。由于多數(shù)熒光分子的激發(fā)太壽命是幾毫微秒的數(shù)量級,,已經(jīng)吸收了偏振光的一部份熒光分子,,到它們發(fā)射熒光時(shí),已經(jīng)偏離開它們的原始取向,,使得發(fā)射出熒光偏振面的方向?qū)l(fā)生變化,。

    若用兩個(gè)互相垂直的偏振面測量發(fā)射的熒光強(qiáng)度之間的關(guān)系,,可以估計(jì)熒光分子自由轉(zhuǎn)動的程度。以I1和I2分別代表平行于或者垂直于激發(fā)光偏振面的熒光強(qiáng)度,。

   流式細(xì)胞術(shù)測量熒光偏振常用的熒光探針為DPH(Di-phenylhexatriene),。DPH是不帶電荷的疏水性物質(zhì),在水介質(zhì)中幾乎沒有熒光,,在非極性溶劑中用紫外光激發(fā),,(zui大激發(fā)波長為351nm),發(fā)藍(lán)色熒光(zui大發(fā)射波長為430nm),。

   DPH的標(biāo)記程序?yàn)椋簩PH制備成溶解于THF (Tetrahydrofuran,,四氫呋喃)濃度為2nM的貯液,保存于4℃暗處,。用PBS稀釋貯存液成為2uM的工作液,,對于含約2×106細(xì)胞的1ml細(xì)胞懸液(在PBS中),加入1ml DPH工作液,,在37℃下消化30分鐘,,離心洗細(xì)胞后,重新懸浮在冷PBS中,,置于冰上待流式測量,。在熒光顯微鏡下觀察DPH結(jié)合熒光,可見到細(xì)胞內(nèi)膜和細(xì)胞外膜呈現(xiàn)明亮藍(lán)色DPH熒光,,其熒光強(qiáng)度約為不染色區(qū)熒光強(qiáng)度的30倍,。

    除DPH以外,還有其它一些測量膜流動性或微粘度的熒光探針,,例如DiIC18(3),,它的激發(fā)zui大值為546nm,發(fā)射zui大值為565nm,。還有DMA-DPH(1-(4-dimethylaminop-henyl)-6-phenylhexatriene)),,它的激發(fā)zui大值為400nm,發(fā)射zui大值為500nm,,DMA-DPH除光譜特性比DPH向長波方向移動外,,另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是向細(xì)胞內(nèi)部標(biāo)記比DPH慢些。

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